HiMedia M1872-500G Модифицированная основа LV агара

Порошкообразная основа питательной среды HiMedia M1872-500G Модифицированная основа LV агара производства HiMedia с дозировкой 97 г на 1000 мл среды. Применяется для выделения анаэробных микроорганизмов из пищевых и молочных образцов; для окончательной идентификации требуются дополнительные биохимические и серологические исследования.

Назначение

Основа модифицированного печёночно-телячьего агара предназначена для выделения Clostridium botulinum из пищевых и молочных образцов. Масса продукта: 500 г.

Применение среды рекомендовано для выделения Clostridium botulinum в соответствии с процедурой FDA «Bacteriological Analytical Manual» (BAM), 1998. Среда также применяется с добавлением 50 % эмульсии яичного желтка FD045F.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

• Настой HL эквивалентен настою печени.
• Настой HMV эквивалентен настою телятины.
• Конечное значение pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация

Анаэробные бактерии живут в среде без кислорода. Некоторые анаэробные бактерии погибают в присутствии кислорода, тогда как другие не способны расти и размножаться в таких условиях.

Модифицированная печёночно-телячья агаровая основа M1872 является модификацией среды, разработанной Spray в 1936 году. Среда рекомендована руководством FDA «Bacteriological Analytical Manual» для выращивания анаэробных микроорганизмов, особенно Clostridium botulinum. Среду применяют с добавлением 50 % эмульсии яичного желтка FD045F.

Clostridium botulinum — анаэробная палочковидная спорообразующая бактерия, продуцирующая белок с характерной нейротоксичностью. При определённых условиях микроорганизмы могут размножаться в пищевых продуктах с образованием высокоопасных ботулинических токсинов. Ботулинические токсины классифицируют на типы от A до G. Все типы, кроме F и G, известны как возбудители ботулизма животных. Различные штаммы классифицируют по антигенным характеристикам с использованием соответствующих антитоксинов. Дополнительно штаммы дифференцируют на основные группы по культуральным, биохимическим и физиологическим характеристикам.

Оба настоя, другие пептоны и желатин служат источниками углерода, азота, аминокислот и различных витаминов. Декстроза является источником энергии. Крахмал усиливает рост анаэробных бактерий. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды. Агар выполняет функцию отверждающего компонента.

Методика проведения анализа

Согласно протоколу FDA BAM, после предварительного исследования подозрительные образцы направляют на обогащение микроорганизмов.

1. Удалите растворённый кислород из образца.
2. Инокулируйте 1–2 г или 1–2 мл образца в среду для варёного мяса M149 и в основу бульона с триптоном, пептоном, глюкозой и дрожжевым экстрактом без трипсина M969.
3. Инкубируйте среды при 35 °C и 25 °C соответственно.
4. После 5 суток инкубации оцените рост по мутности, образованию газа и перевариванию частиц мяса, а также с применением различных методов окрашивания выросшей культуры.
5. Для выделения чистых культур инокулируйте предварительно обработанные спиртом образцы на модифицированную печёночно-телячью агаровую основу M1872 и/или анаэробную яичную агаровую основу M902F.
6. Оцените блестящие зоны; их типы могут различаться, включая вариации жёлтых осадков.
7. Для подтверждения серотипов проведите серологические, биохимические исследования и исследования in vivo.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 97 г порошка в 1000 мл тёплой очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте при 121 °C в течение 15 мин; давление 15 фунтов соответствует приблизительно 0,10 МПа.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 80 мл 50%-ной эмульсии яичного желтка FD045F.
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Тип образцов

• Пищевые образцы.
• Молочные образцы.

Сбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы сбора и обработки образцов согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры предупреждения и предосторожности

• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При работе с образцами и культурами соблюдайте надлежащие правила микробиологической лабораторной практики.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с утверждёнными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения

Для дальнейшей идентификации необходимо выполнить дополнительные биохимические и серологические исследования.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до коричневато-жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель янтарного цвета; возможно наличие небольшого осадка.

Реакция среды

Реакция 9,7%-ного водного раствора, определённая при 25 °C:

• pH: 7,3 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч с добавлением эмульсии яичного желтка при атмосферных условиях, требуемых для соответствующего микроорганизма.

Рабочие характеристики

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Хранение и срок годности

• Храните продукт при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Приготовленную среду храните при температуре 20–30 °C.
• Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Храните продукт в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывайте контейнер.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение указанного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов путём автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте утверждённые лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцом, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.