HiMedia M1872-500G Модифицированная основа LV агара

Модифицированная основа LV агара HiMedia M1872-500G — сухая питательная среда для изоляции Clostridium botulinum в соответствии с руководством FDA BAM. Применяется для анализа проб пищевых продуктов и молочной продукции; вес упаковки составляет 500 г.

Принцип измерения и интерпретация

Среда представляет собой модификацию состава, разработанного Spray в 1936 году, и рекомендована FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM) для выращивания анаэробных организмов, в частности Clostridium botulinum. Данная бактерия является анаэробной палочкой, образующей споры и вырабатывающей нейротоксичный белок (ботулотоксин типов A–G).

Компоненты среды выполняют следующие функции:

• Инфузии печени и телятины (HL и HMV), пептоны и желатин: источники углерода, азота, аминокислот и витаминов.
• Декстроза (глюкоза): основной источник энергии.
• Растворимый крахмал: стимулирует рост анаэробных бактерий.
• Хлорид натрия: обеспечивает осмотический баланс.
• Агар: отвердитель среды.

Методика проведения анализа

Пробоподготовка и обогащение

Согласно протоколу FDA BAM, образцы после предварительного исследования направляют на обогащение:

1. В среду для варки мяса (M149) и бульон на основе триптона, пептона, глюкозы и дрожжевого экстракта без трипсина (M969) вносят 1–2 г или 1–2 мл пробы после удаления растворенного кислорода.
2. Инкубируют при температуре 35 °C и 25 °C соответственно.
3. Через 5 суток инкубации проверяют наличие роста по мутности, газообразованию, перевариванию частиц мяса и с помощью методов окрашивания.

Изоляция чистых культур

Для выделения чистых культур образцы, предварительно обработанные спиртом, инокулируют в модифицированную основу LV агара (M1872) и/или анаэробный яичный агар (M902F). Для подтверждения серотипов проводят серологические, биохимические и in vivo тесты.

Приготовление среды

1. Суспендировать 97 г порошка в 1000 мл теплой очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавить 80 мл 50%-ной эмульсии яичного желтка (FD045F).
6. Тщательно перемешать и разлить по стерильным чашкам Петри.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 7,3 $\pm$ 0,2

Общие параметры

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от светло-желтого до коричневато-желтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным раствором агара.
• Цвет и прозрачность готовой среды: янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель, возможен небольшой осадок.
• Диапазон pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч с добавлением эмульсии яичного желтка (при соблюдении требований организма к атмосфере).

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон необходимо плотно закрыть для предотвращения комкования. Хранить в сухом проветриваемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Ограничения и меры предосторожности

• Для окончательной идентификации микроорганизмов необходимо проведение дополнительных биохимических и серологических тестов.
• При работе с образцами и культурами следует соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности, использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица.
• Загрязненные материалы перед утилизацией должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации.