HiMedia M1871-500G Основа железной среды

Основа питательной среды HiMedia M1871-500G Основа железной среды — порошкообразный компонент для приготовления модифицированной среды с варёным мясом, предназначенной для выделения видов Clostridium. Применяется при микробиологическом исследовании пищевых продуктов, включая выявление Clostridium perfringens, Clostridium botulinum и Clostridium sporogenes, при температуре хранения 10–30 °C.

Назначение

Основа железной среды HiMedia M1871-500G предназначена для выделения видов Clostridium из пищевых продуктов в соответствии с FDA BAM, 1998. Среда также может применяться при низкой концентрации посевного материала и для поддержания культур.

Состав

Состав приведён в граммах на литр.

• Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2
• Эквивалент: твёрдые компоненты говяжьего сердца.
• Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Приготовление среды

Приготовление частей A и B

1. Часть A: внесите 1 г непосредственно в пробирки размером 20 × 150 мм.
2. Часть B: суспендируйте 14,05 г части B в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
3. Готовая среда: перенесите 15 мл среды части B в пробирку, содержащую 1 г части A.
4. Оставьте смесь для смачивания и регидратации всех частиц мяса.
5. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C в течение 15 мин; давление 15 фунтов силы на квадратный дюйм соответствует приблизительно 0,103 МПа.

Принцип действия и интерпретация

Модифицированная среда с варёным мясом приготовлена в соответствии с FDA BAM, 1998, для культивирования видов Clostridium, особенно Clostridium perfringens и Clostridium botulinum, из пищевых продуктов.

Clostridium — крупный род грамположительных спорообразующих анаэробов, являющихся обычными обитателями почвы и возбудителями пищевых отравлений. Выявление C. perfringens, C. sporogenes и Clostridium botulinum имеет значение из-за способности этих микроорганизмов продуцировать энтеротоксин альфа и ботулинические токсины, вызывающие газовую гангрену и ботулизм.

Среда с варёным мясом первоначально разработана Robertson в 1916 году для культивирования отдельных анаэробов, выделенных из ран. Среда допускает работу с низкой концентрацией посевного материала и может использоваться для поддержания культур. Среда обеспечивает рост смешанных бактериальных культур без влияния на рост и свойства других микроорганизмов.

Пептон HMH B и протеозо-пептон обеспечивают среду углеродом, азотом, аминокислотами и другими питательными веществами. Пептон HMH B также содержит глутатион — восстановитель, поддерживающий рост облигатных анаэробов. Сульфгидрильные группы, обеспечивающие восстановительное действие, более доступны в денатурированном белке, поэтому в состав среды добавляется варёное мясо. Декстроза обеспечивает быстрый и обильный рост анаэробных бактерий за короткое время. Тиогликолят натрия снижает окислительно-восстановительный потенциал среды. Крахмал служит источником сложных углеводов, поддерживающих рост анаэробов.

Рост в среде определяется по появлению мутности и/или изменению цвета. Clostridium perfringens ферментирует декстрозу, изменяя цвет среды с розового на жёлтый; некоторые штаммы ферментируют декстрозу поздно. Почернение и разрушение частиц мяса указывают на протеолиз.

Среду рекомендуется использовать в день приготовления. Если среда не используется в день приготовления, перед внесением посевного материала её необходимо прокипятить или обработать паром в течение нескольких минут, после чего дать остыть без перемешивания.

Для культивирования анаэробов посев выполняют ближе ко дну пробирки, непосредственно в частицы мяса. Аэробы растут в верхней части среды, тогда как более строгие анаэробы — глубже в среде.

Методика анализа пищевых продуктов

1. Отберите представительную пробу пищевого продукта массой 25 г.
2. Гомогенизируйте пробу в 225 мл пептонной жидкости для разведений.
3. Приготовьте необходимые разведения.
4. Инокулируйте подготовленные разведения на агар TSC для количественного определения жизнеспособных клеток C. perfringens методом подсчёта колоний.
5. Одновременно инокулируйте 3 или 4 пробирки со средой CMM по 2 мл гомогенизированного раствора. Эти пробирки используют как резервный этап для предшествующей процедуры посева на чашки.
6. Инкубируйте посевы при 35 °C в течение 24–48 ч.
7. Исследуйте культуры микроскопически для оценки морфологии клеток Clostridium, имеющих форму теннисной ракетки.

Тип образца

• Тип образца: пищевые продукты.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых продуктов применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Требуется дальнейшее выделение микроорганизмов на селективных средах.
2. Для полной идентификации необходимо проведение биохимических и серологических тестов.

Оценка эффективности

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с указаниями на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

Внешний вид

• Часть A: коричневые гранулы.
• Часть B: от светло-жёлтого до розового цвета, однородный, свободно пересыпающийся порошок.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Красный слегка опалесцирующий супернатант над нерастворимыми гранулами.

Реакция среды

Реакция среды при концентрации 6,67 % масса/объём части A и 1,41 % масса/объём части B, измеренная при 25 °C:

• pH: 6,8 ± 0,2.

Диапазон pH

• pH: 6,60–7,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч в анаэробных условиях.

Технические характеристики