HiMedia M1871-500G Основа железной среды

Основа железной среды HiMedia M1871-500G для изоляции бактерий рода Clostridium в соответствии с методикой FDA BAM (1998). Применяется для культивирования анаэробов из пищевых продуктов; вес упаковки составляет 500 г.

Область применения

Среда модифицированного состава (Cooked Meat Medium, Modified) предназначена для выделения и культивирования видов Clostridium, в частности Clostridium perfringens и Clostridium botulinum, из проб пищевых продуктов. Используется в случаях низкой концентрации посевного материала, а также для поддержания чистых культур. Среда позволяет выращивать смешанные культуры бактерий без влияния на рост других микроорганизмов.

Принцип измерения

Среда содержит пептон HMH B и протеоз-пептон, которые обеспечивают организм углеродом, азотом, аминокислотами и другими питательными веществами. Пептон HMH B содержит глутатион — восстановитель, необходимый для роста облигатных анаэробов. Сульфгидрильные группы, обеспечивающие восстановительный эффект, более доступны в денатурированном белке, поэтому в состав включено «вареное мясо». Декстроза способствует быстрому и интенсивному росту анаэробных бактерий. Тиогликоллат натрия снижает окислительно-восстановительный потенциал среды, а крахмал обеспечивает сложные углеводы для поддержки роста анаэробов.

Интерпретация результатов

Рост в среде характеризуется помутнением и/или изменением цвета:

• Clostridium perfringens: ферментируют декстрозу, что приводит к изменению цвета среды с розового на жёлтый (некоторые штаммы являются поздними ферментаторами).
• Протеолиз: проявляется почернением и дезинтеграцией частиц мяса.

Аэробы растут в верхней части пробирки, в то время как строго анаэробные виды развиваются в более глубоких слоях среды.

Методика проведения анализа

1. Подготовка образца: 25 г пищевого образца гомогенизируют в 225 мл пептонного разбавляющего раствора.
2. Посев:
   • Готовят соответствующие разведения и инокулируют их на агар TSC для подсчёта жизнеспособных клеток C. perfringens.
   • Одновременно в 3 или 4 пробирки с CMM вносят по 2 мл гомогената в качестве резервного метода.
3. Инкубация: Пробы инкубируют при 35 °C в течение 24–48 ч.
4. Анализ: Проводят микроскопическое исследование для выявления клеток Clostridium характерной формы «теннисной ракетки».

Приготовление среды

Среда состоит из двух частей:

Часть А

Внесите 1 г компонентов Части А непосредственно в пробирки размером 20 × 150 мм.

Часть Б

1. Растворите 14,05 г компонентов Части Б в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Перенесите 15 мл раствора Части Б в пробирку, содержащую 1 г Части А.
3. Оставьте среду на некоторое время для полной регидратации частиц мяса.
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C и давлении $\approx$0,1 МПа (15 фунтов) в течение 15 минут.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 6,8 $\pm$ 0,2
• Эквивалент: Beef heart, solids (сердце говяжье, твердое)

Дополнительные параметры

Контроль качества

Внешний вид

• Часть А: коричневые гранулы.
• Часть Б: светло-жёлтый или розовый однородный свободнотекущий порошок.
• Готовая среда: красная, слегка опалесцирующая надосадочная жидкость над нерастворимыми гранулами.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 часов в анаэробных условиях.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 15–25 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков. Хранить в сухом проветриваемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.
• Рекомендация: использовать среду в день приготовления. Если это невозможно, перед инокуляцией среду следует прокипятить или пропарить в течение нескольких минут и охладить без перемешивания.

Ограничения и предостережения

1. Для окончательной идентификации необходимо проведение биохимических и серологических тестов.
2. Требуется дальнейшая изоляция на селективных средах.
3. Инокуляцию анаэробных культур следует проводить в нижней части пробирки, непосредственно в частицах мяса.
4. Работа с образцами должна проводиться в соответствии с правилами микробиологической безопасности. Загрязненные материалы подлежат стерилизации в автоклаве перед утилизацией.