HiMedia M1852I-500G Модифицированный железо-сульфитный агар

Питательная микробиологическая среда HiMedia M1852I-500G Модифицированный железо-сульфитный агар предназначена для количественного определения сульфитредуцирующих бактерий, растущих в анаэробных условиях. Среда применяется для анализа изолированных микроорганизмов с инкубацией при 36–38 °C в течение 24–48 ч; чёрные колонии, возможно окружённые чёрной зоной, учитывают как сульфитредуцирующие бактерии.

Назначение и область применения

Модифицированный железо-сульфитный агар предназначен для количественного определения сульфитредуцирующих бактерий, растущих в анаэробных условиях. Среда применяется для работы с изолированными микроорганизмами, в том числе для выявления бактерий рода Clostridia.

Состав среды и критерии её эффективности соответствуют требованиям ISO 15213-1:2023 и ISO 11133:2014 с поправкой 2020 года. Методика может выполняться с использованием пробирок или чашек Петри.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных показателей эффективности среды.

• Конечный pH при 25 °C: 7,6 ± 0,2
• Рабочий раствор для определения реакции: 4,15 % масс./об. при 25 °C

Принцип измерения и интерпретация

Большинство представителей рода Clostridia имеют сульфитредуктазу в цитоплазме, но не способны выводить её наружу. При образовании H₂S из сульфита происходит реакция с железом, содержащимся в цитрате, с формированием осадка сульфида железа. В результате колонии приобретают тёмную или чёрную окраску.

Функции компонентов среды:

• пептон и соевый пептон обеспечивают микроорганизмы источниками углерода и азота, витаминами, минеральными веществами и аминокислотами, необходимыми для роста;
• дрожжевой экстракт служит источником витаминов, особенно витаминов группы B;
• железоаммонийный цитрат и дисульфит натрия используются как индикаторы образования H₂S;
• Clostridium perfringens восстанавливает сульфит до сульфида, который реагирует с железом с образованием чёрного осадка сульфида железа, визуально проявляющегося в виде чёрных колоний;
• агар выполняет функцию отверждающего компонента.

Чёрные колонии, возможно окружённые чёрной зоной, учитывают как сульфитредуцирующие бактерии.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 41,50 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,10335 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте.
6. Разлейте среду в стерильные пробирки или налейте в стерильные чашки Петри.

Методика количественного определения

Посев в чашки Петри

1. Используя свежую стерильную пипетку, внесите в каждую чашку Петри 10⁻¹ первого десятичного разведения исследуемой пробы, если продукт является жидким.
2. Для других продуктов внесите в каждую чашку Петри 10⁻² первого десятичного разведения исходной суспензии.
3. Залейте инокулят железо-сульфитным агаром.
4. Осторожно перемешайте инокулят со средой горизонтальными движениями.
5. Оставьте среду до полного застывания.
6. После застывания нанесите поверх среды в чашке Петри слой того же агара объёмом 5–10 мл.

Посев в пробирки

1. Внесите по 1 мл каждого разведения в каждую из двух пробирок со средой.
2. Осторожно перемешайте содержимое, не допуская образования пузырьков.
3. Оставьте среду до застывания.
4. После застывания нанесите в каждую пробирку слой того же агара объёмом 2–3 мл.
5. После застывания инкубируйте среду при 36–38 °C в течение 24–48 ч.

При подозрении на наличие термофильных бактерий подготовьте второй комплект чашек Петри и инкубируйте его при температуре 50 °C ± 1 °C.

Тип образца и обращение с ним

• Тип образца: изолированные микроорганизмы.
• Сбор и обработку образцов изолированных микроорганизмов выполняйте с применением соответствующих методик, руководств и местных нормативных требований.
• После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Сыпучий однородный порошок от светло-жёлтого до желтовато-коричневого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется жёлтый слегка опалесцирующий гель.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией