HiMedia M1852I-500G Модифицированный железо-сульфитный агар

Сухая питательная среда HiMedia M1852I-500G Модифицированный железо-сульфитный агар для подсчёта сульфитредуцирующих бактерий в анаэробных условиях. Состав и критерии эффективности среды соответствуют международным стандартам ISO 15213-1:2023 и ISO 11133:2014 (с поправкой 2020 г.); вес упаковки составляет 500 г.

Принцип измерения и интерпретация

Среда рекомендуется ISO для количественного определения сульфитредуцирующих бактерий. Большинство представителей рода Clostridia обладают сульфитредуктазой в цитоплазме, но не способны выводить её наружу. При образовании H₂S из сульфита колонии окрашиваются в тёмный цвет из-за выпадения осадка сульфида железа из цитрата.

Роль компонентов:

• Пептон и соевый пептон: источники углерода, азота, витаминов, минералов и аминокислот, необходимых для роста микроорганизмов.
• Экстракт дрожжей: богатый резервуар витаминов, особенно группы B.
• Цитрат аммония железа (III) и сульфит натрия: индикаторы H₂S. Clostridium perfringens восстанавливает сульфит до сульфида, который вступает в реакцию с железом, образуя чёрный осадок сульфида железа (чёрные колонии).
• Агар: структурообразующий агент (загуститель).

Методика проведения анализа

Подсчёт может быть выполнен с использованием пробирок или чашек Петри.

Посев в чашки Петри

1. С помощью стерильной пипетки перенесите в каждую чашку 10⁻¹ десятичного разведения жидкого тестового образца (или 10⁻² для других продуктов в виде начальной суспензии).
2. Залейте среду модифицированного железо-сульфитного агара в каждую чашку.
3. Осторожно перемешайте инокулят со средой горизонтальными движениями до застывания.
4. После застывания основного слоя залейте сверху 5–10 мл той же среды в качестве перекрывающего слоя.

Посев в пробирки

1. Внесите 1 мл каждого разведения в две пробирки со средой.
2. Аккуратно перемешайте, избегая образования пузырьков воздуха, и дайте среде застыть.
3. После застывания залейте в каждую пробирку 2–3 мл среды в качестве перекрывающего слоя.

Инкубация и оценка

• Стандартная инкубация: 36–38 °C в течение 24–48 часов.
• При подозрении на термофильные бактерии: подготовить второй набор чашек и инкубировать при 50 °C ± 1 °C.
• Результат: чёрные колонии (возможно, окружённые чёрной зоной) считаются сульфитредуцирующими бактериями.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 41,50 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные пробирки или чашки Петри.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 7,6 ± 0,2.

Контроль качества

• Внешний вид: светло-жёлтый или коричневато-жёлтый однородный свободнотекущий порошок.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5 % раствором агара.
• Цвет и прозрачность готовой среды: жёлтый, слегка опалесцирующий гель.
• Реакция (pH 4,15 % водного раствора при 25 °C): 7,6 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,40–7,80.

Дополнительные параметры

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются в анаэробной атмосфере после инкубации при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч — 48 ± 2 ч. Степень восстановления считается 100 % при росте бактерий на референсной среде — соево-казеиновом дигест-агаре (Tryptone Soya Agar).

Область применения и ограничения

Среда предназначена для работы с изолированными микроорганизмами. При сборе и обработке проб следует руководствоваться местными стандартами и соответствующими методиками.

Ограничения:

1. Различные организмы могут иметь разные требования к росту и демонстрировать вариативность паттернов роста на данной среде.
2. Каждая партия среды протестирована на организмах, указанных в сертификате анализа (COA). Пользователям рекомендуется валидировать среду для конкретных микроорганизмов, не указанных в COA, исходя из своих требований.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

При работе со средой и культурами необходимо использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, защитная одежда, очки/экран) и соблюдать правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.

Утилизация: Загрязнённые материалы и использованные препараты должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией в соответствии с установленными лабораторными процедурами по обращению с инфекционными материалами.