Агар B12 Culture Agar (E. coli Maintenance Medium) HiMedia M185-100G (100 г)

Питательная среда Агар B12 Culture Agar (E. coli Maintenance Medium) HiMedia M185-100G (100 г) производства HiMedia. Рекомендуется для размножения, культивирования и поддержания мутантных штаммов Escherichia coli, используемых в микробиологическом анализе витамина B₁₂.

Область применения

Среда предназначена для культивирования и поддержания штамма E. coli ATCC 11105. Применяется в специализированных лабораториях для подготовки инокулята при проведении количественного анализа витамина B₁₂.

Принцип работы

B12 Culture Agar обеспечивает оптимальный рост мутантных штаммов E. coli за счёт сбалансированного состава:

• Тритон обеспечивает необходимые азот и аминокислоты.
• Экстракт дрожжей служит источником витаминов.
• Сахароза выступает в качестве источника углерода и энергии.
• Соли калия обеспечивают буферную емкость среды.
• Соли натрия, магния и железа контролируют проницаемость бактериальных клеток.
• Экстракт печени (HL extract) обогащает среду для роста E. coli и одновременно подавляет рост грамположительных бактерий.

Методика приготовления и использования

Приготовление среды

1. Суспендируйте 37,85 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Правила культивирования и поддержания штаммов

• Стоковые культуры E. coli ATCC 11105 готовятся методом посева «штыком» (stab cultures) не менее трех раз в неделю.
• Запрещается использовать культуру для приготовления инокулята, если возраст культуры превышает 4 суток.
• Перед использованием свежей культуры для анализа необходимо выполнить не менее 10 последовательных пересевов в течение 15 дней.
• Инкубацию культур проводят при температуре 35 °C в течение 16–24 часов (допустимое отклонение $\pm$0,5 °C).
• После инкубации культуры хранят при температуре 2–8 °C.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечное значение pH (при 25 °C): 7,0 $\pm$ 0,2.

Дополнительные параметры

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободнотекущий порошок от кремового до желтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5% агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: желтый, слегка опалесцирующий гель (при формировании скоса в пробирке).
• Реакция 3,79% (масс./об.) водного раствора при 25 °C: pH 7,0 $\pm$ 0,2.
• Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом помещении, защищенном от экстремальных температур и источников возгорания.
• Хранение готовой среды: при температуре 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков.

Меры предосторожности и утилизация

• При работе использовать защитные перчатки, спецодежду и средства защиты глаз/лица.
• Соблюдать стандартные правила микробиологической лабораторной практики.
• Все загрязненные материалы и использованные среды перед утилизацией подлежат обязательной стерилизации в автоклаве или сжиганию в инсинераторе.