Питательная среда HiMedia M1848-500G Основа CFC агара (цефалотин-натрия фузидат-цетримид) — порошковая основа массой 500 г для селективного выделения видов Pseudomonas. Среда предназначена для анализа пищевых образцов, включая мясо и мясные продукты, с инкубацией при 25 °C; перед применением требует добавления двух флаконов селективной добавки Modified CFC Selective Supplement (FD281).

Назначение

Основа CFC агара рекомендована для селективного выделения видов Pseudomonas из пищевых образцов, в том числе мяса, мясных продуктов и мяса птицы. Методика основана на подсчёте колоний после инкубации посевов на чашках с агаром.

Состав и эксплуатационные характеристики среды соответствуют требованиям ISO 13720:2010, EN ISO 11133:2014 (E) и поправки Amd:2020. Применение среды для конкретных микроорганизмов, не указанных в сертификате анализа, требует предварительной валидации пользователем.

Состав

Состав на 1 л среды:

Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных эксплуатационных характеристик.

Эквивалент ферментативного переваривания желатина.

Эквивалент ферментативного переваривания казеина.

Принцип действия и интерпретация результатов

Основа CFC агара приготовлена в соответствии с ISO 13720 и содержит хлорид магния и сульфат калия, усиливающие образование пигмента у целевых микроорганизмов.

Для селективного выделения видов Pseudomonas в среду добавляют Modified CFC Selective Supplement, содержащую цефалотин, фузидат натрия и цетримид. Добавка подавляет рост видов Klebsiella, Proteus и Providencia.

Среда применяется для количественного определения видов Pseudomonas в мясе и мясных продуктах, включая мясо птицы, методом подсчёта колоний после инкубации при 25 °C в течение 48 ч. Проверку эксплуатационных характеристик проводят в соответствии с ISO 11133.

Технические характеристики

Приготовление среды

1. Суспендируйте 52,4 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (ориентировочно 0,10 МПа) при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Асептически добавьте стерильное восстановленное содержимое двух флаконов Modified CFC Selective Supplement (FD281).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Расплавленный агар не следует выдерживать более 4 ч.

Методика работы с образцами

Подготовка и посев

Обработку проводят в соответствии с ISO 13720:2010.

1. С помощью другой стерильной пипетки перенесите 0,1 мл первого десятичного разведения исходной суспензии на чашку с CFC-агаром (M1848).
2. Равномерно распределите жидкость по поверхности агара стерильным шпателем.
3. Инкубируйте подготовленные чашки в перевёрнутом положении — крышками вниз — в термостате при 25 °C ± 1 °C в течение 44 ч ± 4 ч.
4. После завершения установленного периода инкубации случайным образом отберите пять колоний для подтверждающего теста.

Подтверждение методом оксидазной реакции

1. Поместите диск для определения оксидазной реакции (DD018) на выбранную колонию.
2. Наблюдайте за появлением фиолетовой или пурпурной окраски в течение 10 с.
3. Появление окраски в течение 10 с считают положительной реакцией.
4. Если окраска не изменилась в течение 30 с, реакцию считают отрицательной.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный легко сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель жёлтого цвета.

Реакция раствора

Реакция: реакция 5,24%-ного водного раствора, измеренная при 25 °C.

pH: 7,2 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Продуктивность

Культуральную реакцию наблюдали после инкубации при 25 ± 1 °C в течение 44 ± 4 ч. Степень восстановления принята за 100 % для роста бактерий на референтной среде — агаре с переваром соевых бобов и казеина (триптиказо-соевом агаре).

Ключ: * — соответствующие номера WDCM.

Селективность

Культуральную реакцию наблюдали после инкубации при 25 ± 1 °C в течение 44 ± 4 ч.

Тип образца

Тип образца: пищевые образцы.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения: плотно закрытая ёмкость.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить в сухом виде для предотвращения образования комков вследствие гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования ёмкость необходимо плотно закрывать.
• Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в течение указанного срока годности и соблюдении рекомендуемой температуры хранения.

Меры предосторожности

• Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Разные микроорганизмы имеют различные требования к росту и могут демонстрировать неодинаковые характеристики роста на среде.
2. Каждая серия среды проверяется на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа. Для любого конкретного микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, пользователю рекомендуется провести валидацию среды с учётом особенностей поставленной задачи.
3. Для подтверждения необходимы дополнительные биохимические и серологические исследования.

Эксплуатационные характеристики

Ожидаемые эксплуатационные характеристики среды достигаются при приготовлении и использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, соблюдении рекомендованной температуры хранения и использовании до истечения срока годности.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо безопасно утилизировать с помощью автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов следует соблюдать установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцом, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Техническое отличие от сред общего назначения

Селективность среды обеспечивается не только составом основы с хлоридом магния и сульфатом калия, но и добавлением Modified CFC Selective Supplement (FD281), содержащей цефалотин, фузидат натрия и цетримид; среда предназначена для выделения Pseudomonas из пищевых образцов при 25 °C.

Совместимые реагенты и принадлежности

• Modified CFC Selective Supplement (FD281) — стерильная восстановленная добавка, две ампулы на 1000 мл приготовленной основы.
• Диск для определения оксидазной реакции (DD018) — используется для подтверждения выбранных колоний.