HiMedia M1845-500G Основа агара для Legionella без активированного угля

Питательная среда HiMedia M1845-500G Основа агара для Legionella без активированного угля в форме порошка предназначена для выделения видов Legionella после добавления угольной и ростовой добавок. Основа массой 500 г применяется при анализе клинических и водных проб, а приготовленная среда требует асептического внесения добавок FD280 и FD142 либо селективных добавок.

Назначение

Основа агара для Legionella без активированного угля HiMedia M1845-500G рекомендована для выделения видов Legionella с добавлением угольной добавки.

Типы исследуемых образцов:

• Клинические образцы: мокрота, моча.
• Пробы воды.

Состав

Состав на 1 л:

Конечное значение pH при 25 °C: 6,9 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 12,5 г порошка в 430 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм, что соответствует примерно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона стерильной угольной добавки для агара Legionella (FD280) и одного флакона ростовой добавки BCYE объёмом 50 мл (FD142).
6. Если селективная добавка не используется, в асептических условиях добавьте 10 мл стерильной дистиллированной воды, чтобы довести общий объём до 500 мл.
7. Проверьте конечное значение pH среды: 6,9 ± 0,2.
8. Тщательно перемешайте среду для предотвращения оседания частиц угля.
9. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Приготовление селективной среды

При необходимости среду можно сделать селективной. Для этого в асептических условиях добавьте к 430 мл стерильной расплавленной и охлаждённой основы агара Legionella M1845:

• восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки BMPA (FD144) или
• восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки GVPC (FD143) или
• восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки GVPN (FD242);

а также:

• содержимое одного флакона ростовой добавки BCYE (FD142);
• содержимое одного флакона стерильной угольной добавки (FD280).

Одновременно можно приготовить среду без L-цистеина: для этого в асептических условиях добавьте содержимое одного флакона ростовой добавки Legi без L-цистеина (FD206).

Принцип действия и интерпретация

Агар Legionella, первоначально называвшийся F-G агаром, был модифицирован Feely и соавторами: крахмал заменили активированным углём, а гидролизат казеина — дрожжевым экстрактом. Это улучшило выделение Legionella pneumophila.

Добавление буфера ACES — N-2-ацетамидо-2-аминоэтансульфоновой кислоты — повышает питательную ценность среды и помогает поддерживать необходимое значение pH для оптимального роста Legionella. Добавление α-кетоглутарата повышает чувствительность среды. Дрожжевой экстракт обеспечивает рост Legionella необходимыми азотсодержащими питательными веществами. Активированный уголь нейтрализует токсичные соединения, которые могут накапливаться в среде во время роста микроорганизмов или образовываться при стерилизации среды. Антибиотики, входящие в состав добавок, подавляют рост различных контаминирующих бактерий и грибов.

Виды Legionella имеют абсолютную потребность в L-цистеине. Предположительные колонии Legionella можно пересевать на две среды:

• агар Legionella с добавкой FD142, содержащей L-цистеин;
• агар Legionella с добавкой FD206, не содержащей L-цистеин.

Все чашки инкубируют при 35 °C. Колонии, которые растут на агаре Legionella с FD142 и L-цистеином, но не растут на агаре Legionella с FD206 без L-цистеина, можно рассматривать как предположительные виды Legionella.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид порошка: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

После добавления добавки FD280: в чашках Петри образуется непрозрачный гель чёрного цвета.

Реакция

Реакция 2,5%-ного водного раствора по массе после добавления растворов ростовой добавки BCYE (FD142) и стерильной угольной добавки (FD280) при 25 °C: pH 6,9 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,70–7,10.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления стерильной ростовой добавки BCYE (FD142) и селективной добавки GVPC (FD143) либо ростовой добавки Legi без L-цистеина (FD206), после инкубации при 35–37 °C в течение 48–72 ч.

Обозначения:

• * — рост на агаре Legionella с FD142.
• ~ — в присутствии FD143.
• ** — рост на агаре Legionella с FD206.
• # — соответствующие номера WDCM.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно руководствам и местным стандартам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• При необходимости обращайтесь к индивидуальным паспортам безопасности.

Ограничения применения

1. Разные микроорганизмы имеют различные требования к условиям роста и могут демонстрировать неодинаковые характеристики роста на этой среде.
2. Каждая серия среды проверена на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). Для любого конкретного микроорганизма, не указанного в COA, пользователю рекомендуется валидировать среду с учётом собственных требований.

Рабочие характеристики

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок хранения: использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия хранить продукт в сухом виде в плотно закрытом флаконе.
• Порошок обладает гигроскопичными свойствами; при недостаточно плотном закрытии возможно образование комков.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом, проветриваемом месте, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывать контейнер.
• Для обеспечения рабочих характеристик использовать продукт в течение установленного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов путём автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методами.

Сравнительное отличие

Основа M1845 поставляется без активированного угля, однако при приготовлении среды уголь вносится отдельно в виде стерильной угольной добавки FD280; наличие или отсутствие L-цистеина определяется выбором добавки FD142 либо FD206.