HiMedia M1845-500G Основа агара для Legionella без активированного угля

Основа агара для Legionella без активированного угля HiMedia M1845-500G предназначена для изоляции видов Legionella при условии добавления соответствующих добавок. Среда используется для анализа клинических образцов (мокрота, моча) и проб воды; вес упаковки составляет 500 г.

Принцип измерения

Среда разработана на основе модификаций агара F-G, где крахмал заменён активированным углем, а гидролизат казеина — дрожжевым экстрактом, что обеспечивает более эффективное восстановление Legionella pneumophila. Дрожжевой экстракт служит источником необходимых азотистых питательных веществ. Активированный уголь нейтрализует токсичные соединения, которые могут накапливаться в среде в процессе роста или образовываться при стерилизации. Добавление буфера ACES (N-2-ацетамидо-2-аминоэтансульфоновая кислота) поддерживает оптимальный pH для роста бактерий, а антибиотики в составе добавок подавляют рост сопутствующей микрофлоры (бактерий и грибов).

Виды Legionella имеют абсолютную потребность в L-цистеине. Для подтверждения вида предполагаемые колонии пересевают на основу M1845 с добавкой FD142 (с L-цистеином) и с добавкой FD206 (без L-цистеина). Колонии, растущие только на среде с L-цистеином, считаются предполагаемыми видами Legionella.

Состав

Состав, г/л:

Конечный pH (при 25 °C): 6,9 ± 0,2.

Методика приготовления и использования

Приготовление базовой среды

1. Суспендируйте 12,5 г порошка в 430 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.

Добавление компонентов

• Стандартный вариант: асептически добавьте содержимое 1 флакона стерильной добавки активированного угля для агара Legionella (FD280) и 1 флакона добавки для роста BCYE (FD142, 50 мл). Если селективные добавки не используются, асептически добавьте 10 мл стерильной дистиллированной воды, чтобы довести общий объём до 500 мл.
• Селективный вариант: асептически добавьте содержимое 1 флакона селективной добавки BMPA (FD144), GVPC (FD143) или GVPN (FD242) вместе с добавками FD142 и FD280 в 430 мл стерильного расплавленного и охлаждённого агара M1845.
• Вариант без L-цистеина: асептически добавьте содержимое 1 флакона добавки Legi Growth Supplement w/o L-Cysteine (FD206).

После добавления компонентов тщательно перемешайте среду, чтобы предотвратить осаждение частиц угля, и разлейте в стерильные чашки Петри. Конечный pH должен составлять 6,9 ± 0,2.

Технические характеристики

• Внешний вид: однородный свободнотекучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: после добавления FD280 образуется чёрный непрозрачный гель.
• Диапазон pH: 6,70–7,10.

Контроль качества и культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 48–72 часов.

Условные обозначения:

• * — рост на основе M1845 с добавкой FD142.
• ~ — в присутствии добавки FD143.
• ** — рост на основе M1845 с добавкой FD206.

Область применения и ограничения

Типы образцов

• Клинические образцы: мокрота, моча.
• Пробы воды.

Ограничения

• Индивидуальные организмы могут иметь различные требования к росту и демонстрировать вариативность паттернов роста на данной среде.
• Каждая партия среды протестирована на организмах, указанных в сертификате анализа (COA). При необходимости использования для специфических микроорганизмов, не указанных в COA, рекомендуется провести собственную валидацию.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрыть для предотвращения образования комков. Хранить в сухом проветриваемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

• Только для профессионального использования в целях диагностики in vitro.
• При работе использовать защитные перчатки, одежду, средства защиты глаз и лица. Соблюдать правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• Утилизация: все использованные или непригодные препараты, а также материалы, контактировавшие с клиническими образцами, должны быть обеззаражены путем автоклавирования или инсинерации.