Агар Мюллера Хинтона HiMedia M1825-500G (500 г)

Питательная агаризованная среда Агар Мюллера Хинтона HiMedia M1825-500G (500 г) с 2 % глюкозы и метиленовым синим предназначена для диско-диффузионного определения чувствительности дрожжей к противогрибковым препаратам. Среда применяется для анализа чистых культур микроорганизмов, а её состав обеспечивает рост грибов и визуальное определение краёв зон ингибирования.

Назначение

Агар Мюллера—Хинтона модифицированный рекомендован для проведения диско-диффузионного теста на чувствительность дрожжей к противогрибковым препаратам.

Тип образца: выделенный микроорганизм из клинических образцов.

Среда предназначена только для диагностики in vitro и профессионального применения.

Состав

Состав на 1 л:

Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,1.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Основа эквивалентна настою говядины.

Принцип действия и интерпретация

Изначально формула агара Мюллера—Хинтона была разработана как простая прозрачная агаризованная среда для культивирования патогенных видов.

Модифицированный агар Мюллера—Хинтона, соответствующий требованиям CLSI для противогрибкового анализа, применяется для диффузии противогрибковых веществ, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель. Добавление глюкозы до конечной концентрации 2 % обеспечивает подходящий рост грибов. Метиленовый синий в конечной концентрации 5 мкг/мл улучшает определение границ зон ингибирования.

Методика определения чувствительности с использованием одного диска с высокой концентрацией была рекомендована Kirby—Bauer и соавторами. Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов. Агар Мюллера—Хинтона с 5 % бараньей кровью и агар Мюллера—Хинтона с гемоглобином рекомендованы для тестирования чувствительности к противомикробным препаратам Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae. Модифицированный агар Мюллера—Хинтона, соответствующий требованиям CLSI для противогрибкового анализа, применяется для тестирования чувствительности к противогрибковым дискам.

Настой HM B и Acicase™ обеспечивают среду азотистыми соединениями, углеродом, серой и другими необходимыми питательными веществами. Крахмал действует как защитный коллоид против токсичных веществ, присутствующих в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Декстроза (глюкоза) является источником энергии для грибковых культур, а метиленовый синий улучшает определение границ зон ингибирования.

По сравнению с базовой формулой агара Мюллера—Хинтона модифицированный состав содержит 2 % глюкозы и метиленовый синий в концентрации 5 мкг/мл.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию 58,0 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа; ≈1,03 бар) при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Эффективность партии проверена и стандартизирована в соответствии с действующим документом CLSI M44-A2, ранее обозначавшимся как NCCLS, для метода диско-диффузионного определения чувствительности дрожжей к противогрибковым препаратам.

Методика подготовки посевного материала

1. Приготовьте посевной материал, отобрав пять отдельных колоний размером приблизительно 1 мм из 24-часовой культуры, выращенной на агаре Сабуро с декстрозой (M063) и инкубированной при 35 ± 2 °C.
2. Суспендируйте колонии в 5 мл стерильного 0,85%-ного физиологического раствора.
3. Перемешайте полученную суспензию на вихревом смесителе.
4. Отрегулируйте мутность суспензии до концентрации 1 × 10⁶–5 × 10⁶ клеток/мл, соответствующей стандарту 0,5 Мак-Фарланда.

Методика диско-диффузионного тестирования

1. Подготовьте чашки с модифицированным агаром Мюллера—Хинтона, соответствующим требованиям CLSI для противогрибкового анализа. Среда в чашках должна быть стерильной и иметь толщину приблизительно 4 мм.
2. Погрузите стерильный нетоксичный ватный тампон на деревянном аппликаторе в стандартизованную суспензию. Мутность суспензии должна обеспечивать получение полусливного роста на чашке Петри.
3. Плотно проверните смоченный тампон о верхнюю внутреннюю стенку пробирки, чтобы удалить избыток жидкости.
4. Засейте всю поверхность агара тампоном три раза, поворачивая чашку на 60° между нанесениями.
5. Оставьте посевной материал высыхать на 5–15 мин, не снимая крышку.
6. Асептически нанесите диски. Располагайте диски так, чтобы расстояние между их центрами составляло не менее 24 мм. На чашку диаметром 150 мм помещайте не более 12 дисков, а на чашку диаметром 100 мм — не более 5 дисков.
7. Переверните чашки и поместите их в инкубатор, установленный на 35 ± 2 °C, не позднее чем через 15 мин после нанесения дисков.
8. Исследуйте каждую чашку после 20–24 ч инкубации. При правильно выполненном посеве зоны ингибирования должны быть равномерно круглыми, а рост — формировать полусливной газон.
9. Проводите считывание через 48 ч только при недостаточном росте после 24 ч инкубации.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Наименование: агар Мюллера—Хинтона, 2 % глюкозы с метиленовым синим
• Артикул: M1825-500G
• Назначение изделия: агар
• Масса: 500 г
• Происхождение: животное
• Тип продукта: стандартный
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)
• Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,1
• pH 5,8%-ного водного раствора при 25 °C: 7,20–7,40
• Температура растворения: до кипения
• Стерилизация: автоклавирование при 121 °C в течение 15 мин
• Давление при стерилизации: 15 фунтов на квадратный