Лактозный агар с полимиксином и бацитрацином для селективного выделения Burkholderia cepacia HiMedia M1811-500G (уп/500 гр)

Диагностическая питательная среда Лактозный агар с полимиксином и бацитрацином для селективного выделения Burkholderia cepacia HiMedia M1811-500G (уп/500 гр) предназначена для приготовления селективного агара в виде порошка массой 500 г. Питательная среда применяется для выделения Burkholderia cepacia из клинических и неклинических образцов; типичное появление колоний происходит через 48–72 ч при инкубации 30–35 °C, но развитие окраски у некоторых штаммов может занимать до 5 суток.

Назначение

Лактозный агар с полимиксином и бацитрацином, также обозначаемый как OFPBL Agar Base (Oxidation Fermentation Polymyxin Bacitracin Lactose Agar Base), предназначен для селективного выделения Burkholderia cepacia из клинических и неклинических образцов после добавления селективной добавки OFPBL Selective Supplement FD269.

• Тип питательной среды: диагностическая
• Назначение изделия: агар
• Сертификат: ФСЗ 2012/12473
• Тип продукта: стандартный
• Физическая форма: порошок
• Происхождение: животное
• Тип упаковки: ПЭВП (полиэтилен высокой плотности, HDPE)

Состав

Формула на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

• Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2

Принцип действия и интерпретация

Burkholderia cepacia — условно-патогенный микроорганизм, обычно связанный с внутрибольничными инфекциями. Благодаря способности длительное время выживать в неблагоприятных условиях Burkholderia cepacia может обнаруживаться в различных ингибирующих средах и объектах, включая оборудование, лекарственные препараты, средства для полоскания рта и дезинфицирующие средства.

Внутрибольничные инфекции, вызываемые этим микроорганизмом, включают бактериемию, инфекции мочевыводящих путей и респираторные инфекции. Наиболее серьёзное значение имеет выявление Burkholderia cepacia у пациентов с муковисцидозом (МВ). Пациенты с муковисцидозом предрасположены к инфекции; при отсутствии лечения у инфицированных пациентов возможны быстрое снижение функции лёгких, повторная бактериемия и смерть вследствие лёгочной недостаточности. Также сообщается, что Burkholderia cepacia является одной из основных причин бактериемии, пневмонии и смерти у пациентов с хронической гранулематозной болезнью (ХГБ).

Поэтому выделение и правильная идентификация микроорганизма должны выполняться быстро и точно. Агар Burkholderia Cepacia M1640 и агар OFPBL M1811 рекомендуются для выделения Burkholderia cepacia из клинических образцов.

Среда OFPBL представляет собой модифицированный вариант базальной среды OF (окисление–ферментация), разработанной группой исследователей Welch и соавторами в 1987 году. При сравнении с другими селективными средами, включая агар МакКонки, агар XLD и различные кровяные агары, OFPBL обеспечивал улучшенное восстановление и выделение Burkholderia cepacia.

Принцип действия компонентов среды:

• Триптон обеспечивает необходимые азотсодержащие соединения.
• Лактоза служит источником углеводов и легко утилизируется Burkholderia cepacia.
• Ферментация лактозы приводит к образованию кислых конечных продуктов, которые выявляются индикатором pH — бромтимоловым синим.
• При образовании достаточного количества кислоты среда изменяет цвет с зелёного на жёлтый, придавая колониям жёлтую окраску.
• Дикалий гидрофосфат обеспечивает буферную ёмкость среды.
• Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс.
• Селективность среды обусловлена антибиотиками полимиксином B и бацитрацином. В совокупности антибиотики подавляют бактериальную флору, присутствующую в респираторных секретах и мокроте, включая грамположительные микроорганизмы и Neisseria.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию из 32,33 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения компонентов среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (ориентировочно ≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки OFPBL Selective Supplement FD269.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри или используйте другим предусмотренным способом.

Образцы и посев

Тип образца

• Клинические образцы: мазки мокроты.

Подходящие образцы пациентов включают мокроту, бронхиальные смывы и мазки из зева.

Пробоподготовка и нанесение

Для посева можно использовать прямой или разведённый инокулят из образца. Для получения хорошо изолированных колоний допускается штриховой посев по четырём секторам.

При сборе образца тампоном тампон можно прокатать по небольшому участку у края чашки, после чего выполнить дальнейший посев стерильной петлёй для получения изолированных колоний.

При работе с клиническими образцами необходимо применять соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным лабораторным руководствам. После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Условия инкубации и интерпретация результатов

Инкубируйте чашки при 30–35 °C. Осматривайте чашки ежедневно в течение максимум 5 суток, после чего утилизируйте их. Обычно колонии развиваются через 48–72 ч.

Типичные колонии Burkholderia cepacia имеют жёлтую окраску и жёлтые ореолы. Большинство штаммов растёт в течение 48 ч, однако некоторым штаммам может потребоваться до 5 суток для развития окраски.

Большинство других микроорганизмов на этой среде подавляется. Сходные бактерии, например Pseudomonas aeruginosa, также могут расти в виде жёлтых колоний, поэтому для дифференциации этих бактерий и Burkholderia cepacia необходимо провести дополнительные исследования.

Burkholderia gladioli, выявляемая в образцах дыхательных путей пациентов с муковисцидозом, также растёт на агаре OFPBL и может быть похожа на B. cepacia.

Любой рост рассматривается как положительный результат. Для дальнейшей идентификации необходимо выполнить дополнительные биохимические и/или серологические тесты изолированных колоний чистой культуры.

Пожелтение среды указывает на ферментацию углеводов. Некоторые редкие атипичные штаммы Burkholderia cepacia могут не давать этой реакции.

Технические характеристики

• Концентрация для приготовления: 32,33 г/л
• Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2
• Реакция: реакция водного раствора концентрацией 3,23 % мас./об. при 25 °C
• Физическая форма: порошок
• Цвет и внешний вид порошка: от жёлтого до желтовато-зелёного, однородный, свободно сыпучий
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: зелёный прозрачный или слегка опалесцирующий гель в чашках