HiMedia M1803-500G Основа агара для Clostridium brazier

Основа селективной питательной среды HiMedia M1803-500G для изоляции и дифференциации Clostridium difficile (агар Брейзера). Применяется для выделения патогенных клостридий из проб пищевых продуктов и клинического материала; вес упаковки составляет 500 г.

Область применения

Среда рекомендована для изоляции и дифференциации Clostridium difficile (патогенных клостридий, поражающих кишечник) при добавлении соответствующих добавок. Используется для диагностики псевдомембранозного колита (PMC), антибиотик-ассоциированного колита (AAC), хронических воспалительных заболеваний кишечника, а также послеоперационной и неассоциированной с антибиотиками диареи.

Принцип измерения и интерпретация

Среда разработана на основе методики Джона Брейзера. Селективные агенты, содержащиеся в добавке Clostridium Difficile Supplement (FD010) (D-циклосерин и цефокситин), подавляют рост большинства представителей Enterobacteriaceae, Enterococcus faecalis, стафилококков, грамотрицательных анаэробных бацилл и других видов Clostridium, отличных от C. difficile.

Особенности состава и идентификация

• Эмульсия яичного желтка (FD045): позволяет дифференцировать C. difficile от лецитиназа-положительных клостридий.
• Лизированная конская кровь: усиливает распознавание флуоресценции колоний при исследовании в УФ-свете.
• Холевая кислота: стимулирует прорастание спор после шоковой обработки.
• p-гидроксифенилуксусная кислота: усиливает выработку p-крезола, специфического метаболита C. difficile.

Интерпретация результатов

Типичные характеристики C. difficile проявляются через 24 часа анаэробной инкубации при 35–37 °C:

• Колонии серые, матовые, плоские, приподнятые, обычно округлые (могут быть вытянутыми).
• При инкубации до 48 часов колонии могут стать светло-серыми или приобрести белый центр, достигая 4–6 мм в диаметре.

Методика приготовления и использования

1. Суспендируйте 47,66 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте:
   • регидратированное содержимое 2 флаконов добавки Clostridium Difficile Supplement (FD010);
   • 40 мл эмульсии яичного желтка (FD045);
   • 10 мл лизированной конской крови.
6. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 7,0 $\pm$ 0,2

Дополнительные параметры

Контроль качества

Внешний вид и свойства

• Вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до желтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,2 % агаром.
• Цвет и прозрачность:
  • Базовая среда: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
  • После добавления эмульсии желтка (FD045) и конской крови: коричневатый (tan) матовый гель.
• Реакция: pH 4,76 % (масса/объем) водного раствора при 25 °C составляет 7,0 $\pm$ 0,2.
• Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Испытано в анаэробных условиях с добавлением Clostridium Difficile Supplement (FD010), эмульсии яичного желтка (FD045) и 10 мл лизированной конской крови после инкубации при 35–37 °C в течение 48 часов.

Ограничения и предупреждения

1. Из-за наличия антибиотиков в среде типичная морфология C. difficile при окрашивании по Грамму в колониях может не наблюдаться.
2. Некоторые изоляты могут демонстрировать слабый рост из-за вариаций в питательных потребностях.
3. Работа с образцами должна проводиться в соответствии с правилами микробиологической безопасности. Загрязненные материалы подлежат стерилизации в автоклаве перед утилизацией.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом помещении. Из-за гигроскочности продукта необходимо плотно закрывать крышку во избежание комкования.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Срок годности: указан на этикетке.