Основа агара с олеиновой кислотой для микобактерий HiMedia M179-500G (уп/500 гр)

Питательная агаровая среда Основа агара с олеиновой кислотой для микобактерий HiMedia M179-500G (уп/500 гр) — порошковая базовая среда для культивирования микобактерий. Основа агара применяется при посеве клинических образцов, включая мокроту, и требует инкубации в аэробных условиях с повышенным содержанием CO₂ для предотвращения ложноотрицательных результатов.

Назначение

Среда предназначена для культивирования микобактерий, включая выделение и последующее выращивание возбудителя туберкулёза из клинических образцов. Тип питательной среды: базовый. Назначение изделия: основа.

Тип диагностики: только диагностика in vitro.
Регистрационный документ: ФСЗ 2009/03709.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Конечный pH при 25 °C: 6,6 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация

Mycobacterium tuberculosis, вызывающая туберкулёз у человека, переносится в воздушных частицах, известных как капельные ядра, которые образуются при кашле пациентов с лёгочным туберкулёзом. Инфицирование происходит при вдыхании восприимчивым человеком капельных ядер, содержащих бактерии.

Микобактерии обычно выделяют на средах с основой из коагулированного яйца или на агаризованных средах. Среды Middlebrook и Dubos содержат агар, тогда как среды Lowenstein содержат яйцо. Преимущество агара заключается в том, что сопутствующие протеолитические микроорганизмы-загрязнители не разжижают среду. Агаризованные среды обычно рекомендуются для исследования образцов, полученных из нестерильных участков.

Агаризованные среды можно сделать селективными добавлением антибиотиков, поскольку их затвердевание обеспечивается агаром, а не уплотнением при нагревании, как у сред на яичной основе. Dubos и Middlebrook рекомендовали жидкую основу Dubos с олеиновой кислотой для первичного выделения и последующего культивирования туберкулёзных бацилл.

Среда Dubos содержит триптон и L-аспарагин как источники азота. Фосфаты вместе с хлоридом кальция выполняют буферную функцию и служат источниками фосфатов. Сульфат магния, сульфат цинка, сульфат меди и цитрат аммония железа обеспечивают среду микроэлементами и сульфатами. Основа агара Dubos с олеиновой кислотой приготовлена без глицерина и декстрозы для предотвращения роста комменсальных микроорганизмов.

Тип образца

Тип образца: клинический образец — мокрота.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 4 г порошка в 180 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте к 180 мл стерильной охлаждённой среды 20 мл стерильной добавки с олеиновой кислотой и альбумином FD020, а также 5 000–10 000 единиц пенициллина.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные пробирки или чашки.

Сбор и обработка образцов

Для выделения микобактерий из исследуемых образцов необходимо применять стандартные процедуры. Перед посевом образец следует надлежащим образом деконтаминировать в соответствии со стандартными методами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Условия культивирования

Культурные характеристики оценивают при следующих условиях:

• Добавка: стерильная добавка с олеиновой кислотой и альбумином FD020.
• Антибиотик: пенициллин, 5 000–10 000 единиц.
• Содержание CO₂: 5–10 %.
• Температура: 35–37 °C.
• Первичный период инкубации: до 7 суток.
• Дополнительный период наблюдения за ростом: 2–4 недели.

Надлежащие аэробные условия и повышенное содержание CO₂ должны поддерживаться во время инкубации. Отсутствие этих условий может привести к отрицательному результату.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдали в присутствии 5–10 % CO₂, после добавления стерильной добавки с олеиновой кислотой и альбумином FD020 и 5 000–10 000 единиц пенициллина, при 35–37 °C в течение до 7 суток. Дополнительный рост может наблюдаться в течение 2–4 недель.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или коричневато-жёлтый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Реакция среды

Реакция 2,0%-ного водного раствора при 25 °C: pH 6,6 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 6,40–6,80.

Технические характеристики

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Ёмкость: плотно закрытая.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде.
• Продукт гигроскопичен; неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Место хранения: сухая, вентилируемая зона, защищённая от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования контейнер следует плотно закрывать.
• Рабочие характеристики сохраняются при использовании в пределах установленного срока годности и хранении при рекомендованной температуре.

Меры предосторожности

• Только для профессионального использования.
• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Рекомендации по безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.
• При работе с материалом, потенциально содержащим микобактерии, необходимо соблюдать утверждённые лабораторные процедуры биологической безопасности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованной или непригодной к применению среды посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов необходимо соблюдать утвержд