HiMedia M1781-500G Модифицированная основа среды Листерия Оксфорд

Питательная среда HiMedia M1781-500G Модифицированная основа среды Листерия Оксфорд производства HiMedia — порошковая основа массой 500 г для приготовления селективной среды. Предназначена для выделения и дифференциации видов Listeria из клинических, пищевых и молочных образцов; перед использованием основу стерилизуют автоклавированием при 121 °C в течение 10 мин и дополняют селективной добавкой.

Назначение

Модифицированная основа среды Листерия Оксфорд рекомендована для выделения и дифференциации видов Listeria из клинических образцов, а также пищевых и молочных проб.

Типы исследуемых образцов:

• Клинические образцы: вагинальные мазки.
• Пищевые и молочные образцы.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных характеристик эффективности.

Эквивалент: экстракт говяжьего сердца.

Принцип действия и интерпретация

Listeria monocytogenes — единственный вид рода Listeria, имеющий существенное значение как возбудитель заболеваний человека. Listeria seeligeri, Listeria welshimeri и Listeria ivanovii связаны с заболеваниями животных. Все виды Listeria могут быть патогенны для овец и крупного рогатого скота.

Положительный диагноз листериоза может быть получен только посредством выделения и культивирования возбудителя из образцов крови или спинномозговой жидкости поражённых организмов. Основа среды Листерия Оксфорд разработана на основе состава, описанного Curtis и соавторами, для выделения L. monocytogenes из клинических и пищевых образцов.

Триптон, экстракт HMH B, пептон протеозы B и дрожжевой экстракт служат источниками углерода, азотистых соединений, аминокислот с длинной цепью, витаминов и других необходимых питательных веществ. Кукурузный крахмал нейтрализует образующиеся токсичные метаболиты.

Хлорид лития и антибиотики подавляют грамотрицательные бактерии и большинство грамположительных организмов, однако некоторые штаммы стафилококков могут формировать колонии, отрицательные по реакции на эскулин. Циклогексимид применяется для снижения грибковой контаминации; цефотетан и фосфомицин подавляют избыточный рост бактерий. Акрифлавин, сульфат колистина и хлорид лития подавляют бактерии, не относящиеся к видам Listeria. В качестве альтернативы можно добавлять моксалактам (FD266), подавляющий как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии.

L. monocytogenes гидролизует эскулин до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с ионами железа, в результате чего вокруг колоний образуются чёрные зоны.

Селективность среды достаточна для выделения и дифференциации микроорганизмов при прямом поверхностном посеве, однако рекомендуется предварительно разводить инокулят, особенно если образец сильно загрязнён сопутствующей микрофлорой. Метод выделения выбирают с учётом типа исследуемого материала. Для всех образцов рекомендуется селективное и холодовое обогащение.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 57,5 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при 121 °C в течение 10 мин; давление 15 фунтов-силы на квадратный дюйм, ориентировочно ≈0,103 МПа.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое 2 флаконов добавки Oxford Listeria Supplement (FD071) или 2 флаконов добавки Listeria Moxalactam Supplement Modified (FD266).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Методика подготовки и анализа образцов

Клинические, фекальные и биологические образцы

1. Соберите и обработайте клинические образцы в соответствии с установленными правилами работы с образцами.
2. Для фекальных и биологических образцов гомогенизируйте пробу в 0,1%-ной пептонной воде (M028).
3. Возьмите 0,1 мл подготовленной пробы и либо непосредственно нанесите на селективную среду для Listeria, либо внесите в селективный обогатительный бульон.
4. При использовании селективного обогащения инкубируйте посев при 30 °C в течение 7 суток.
5. Перенесите обогащённую культуру на селективную среду для Listeria.

Пищевые и экологические образцы

Для пищевых и экологических образцов обычно применяют селективное обогащение.

Образцы пищевых продуктов, молока и молочных продуктов

1. Внесите 25 мл или 25 г образца в 225 мл обогатительного бульона для Listeria UVM (M890A).
2. Гомогенизируйте образец и тщательно перемешайте.
3. Инкубируйте в течение 48 ч при 30 °C.
4. Выполните штриховой посев обогащённой культуры на основу среды Листерия Оксфорд.
5. Инкубируйте в аэробных условиях в течение 48 ч при 37 °C.
6. Отберите 5 типичных колоний, положительных по реакции на эскулин.
7. Перенесите отобранные колонии на среду для переваривания казеина соевыми ферментами (M290).
8. Инкубируйте в течение 24 ч.
9. Используйте полученные колонии для биохимического подтверждения.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: M1781-500G
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Физическая форма: порошок
• Масса: 500 г
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: ПНД (полиэтилен высокой плотности)
• Происхождение: животное
• Конечный pH: 7,2 ± 0,2 при 25 °C
• Диапазон pH: 7,00–7,40
• Температура хранения: 10–30 °C для сухого продукта; 2–8 °C для приготовленной среды

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до тёмно-жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,0%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель тёмно-янтарного цвета с голубоватым оттенком.

Реакция

Реакция 5,55%-ного водного раствора при 25 °C: pH 7,2 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления добавки Oxford Listeria Supplement (FD071) или модифицированной добавки Listeria Moxalactam Supplement (FD266) и инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

| Организм | Посевная д