HiMedia M1781-500G Модифицированная основа среды Листерия Оксфорд

Модифицированная основа среды Листерия Оксфорд HiMedia M1781-500G предназначена для изоляции и дифференциации видов Listeria из клинических образцов. Среда обеспечивает селективный рост патогенов рода Listeria с возможностью идентификации по гидролизу эскулина.

Принцип измерения

Среда основана на рецептуре Кертиса и др. для выделения L. monocytogenes из клинических и пищевых проб.

Триптон, экстракт сердцевины говядины (HMH extract B), протеоз-пептон B и дрожжевой экстракт служат источниками углерода, азота, длинноцепочечных аминокислот, витаминов и других необходимых питательных веществ. Кукурузный крахмал нейтрализует образующиеся токсичные метаболиты. Хлорид лития и антибиотики подавляют рост грамотрицательных бактерий и большинства грамположительных организмов (хотя некоторые штаммы стафилококков могут расти в виде эскулин-отрицательных колоний). Циклогексимид снижает контаминацию грибами; цефотетан и фосфомицин ингибируют избыточный бактериальный рост. Акрифлавин, сульфат колистина и хлорид лития подавляют бактерии, отличные от видов Listeria. В качестве альтернативы может быть добавлен моксалактам (FD266), который ингибирует как грамположительные, так и грамотрицательные бактерии.

L. monocytogenes гидролизует эскулин до эскулетина и декстрозы. Эскулетин реагирует с ионами железа, образуя чёрные зоны вокруг колоний.

Область применения

Среда используется для анализа следующих типов образцов:

• Клинические образцы: вагинальные мазки, образцы крови или спинномозговой жидкости (СМЖ).
• Пищевые и молочные продукты.
• Образцы окружающей среды.

Методика проведения анализа

Для всех типов образцов рекомендуется предварительное селективное охлаждающее обогащение.

Для фекальных и биологических образцов:

1. Образец гомогенизируют в 0,1 % пептонной воде (M028).
2. Аликоту 0,1 мл высевают непосредственно на селективную среду для листерий или инокулируют в селективный обогатительный бульон.
3. Инкубируют при 30 °C в течение 7 дней, после чего делают пересев на селективную среду для листерий.

Для пищевых и молочных продуктов:

1. 25 мл или 25 г образца добавляют к 225 мл обогатительного бульона для листерий UVM (M890A).
2. Тщательно гомогенизируют и перемешивают.
3. Инкубируют в течение 48 часов при 30 °C.
4. Обогащенные культуры пересевают на модифицированную основу среды Листерия Оксфорд.
5. Инкубируют аэробно в течение 48 часов при 37 °C.
6. 5 типичных колоний (эскулин-положительных) инокулируют на соево-казеиновую среду (M290).
7. Инкубируют 24 часа, после чего используют колонии для биохимического подтверждения.

Приготовление и стерилизация

1. Суспендировать 57,5 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$ 0,1 МПа / 15 psi) в течение 10 минут.
4. Охладить до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавить содержимое 2 флаконов добавки Oxford Listeria Supplement (FD071) или 2 флаконов Listeria Moxalactam Supplement Modified (FD266).
6. Тщательно перемешать и разлить по стерильным чашкам Петри.

Технические характеристики

Основные параметры

• Назначение: Основа среды
• Вес: 500 г
• Внешний вид: однородный свободнотекущий порошок от светло-жёлтого до тёмно-жёлтого цвета
• Цвет и прозрачность готовой среды: тёмно-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель с синим оттенком
• Реакция (pH 5,55 % водного раствора при 25 °C): 7,2 $\pm$ 0,2
• Диапазон pH: 7,00–7,40
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,0 % агаром

Состав, г/л

Дополнительные спецификации

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при использовании добавки Oxford Listeria Supplement (FD071) или Listeria Moxalactam supplement Modified (FD266) после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать для предотвращения образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников возгорания.

Ограничения и предостережения

1. Для полной идентификации необходимо проведение дополнительных биохимических и серологических тестов.
2. Для некоторых энтерококков после 40 часов инкубации может наблюдаться слабая или отсутствующая реакция на эскулин.
3. Только для диагностики in vitro и профессионального использования.
4. При работе с клиническими образцами следует соблюдать стандартные меры предосторожности и использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица).