Основа агара Борде-Жангу с 1,6% агара HiMedia M175A-500G (уп/500 гр)

Основа питательной среды «Основа агара Борде-Жангу с 1,6% агара HiMedia M175A-500G (уп/500 гр)» с конечным pH 6,7±0,2. Предназначена для выявления и выделения Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis, включая метод «кашлевой чашки», с добавлением 15–20 % стерильной дефибринированной крови.

Назначение

Основа агара Борде-Жангу применяется для выявления и выделения Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis. Среда также используется при проведении метода «кашлевой чашки» для диагностики коклюша.

Тип изделия: основа питательной среды
Форма выпуска: порошок
Фасовка: 500 г
Производитель: HiMedia
Сертификат: ФСЗ 2009/03709
Происхождение: животное

Состав

Формула среды на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных эксплуатационных параметров.

Конечный pH при 25 °C: 6,7±0,2.

Принцип действия и интерпретация результатов

Среда Борде—Жангу первоначально разработана Борде и Жангу для культивирования видов Bordetella. Основа агара Борде-Жангу с 1,6 % агара аналогична основе агара Борде-Жангу, но отличается концентрацией агара.

Bordetella pertussis является возбудителем коклюша. При использовании техники «кашлевой чашки» B. pertussis может быть выделена из фарингеальных экстрактов, носоглоточного секрета и мазков из передних отделов носа.

Кендрик и Элдеринг модифицировали исходную среду, заменив 50 % человеческой или кроличьей крови на 15 % овечьей крови. Это повысило обогащённость среды и облегчило выявление B. pertussis по гемолитической реакции. Обогащение базовой среды 25 % человеческой крови способствует выявлению видов Mycobacterium из небольших посевных доз мокроты и используется при тестировании чувствительности к стрептомицину.

Среда содержит питательные компоненты, поддерживающие обильный рост видов Bordetella. Среда также может применяться для массового культивирования B. pertussis при производстве вакцин и для поддержания маточных культур.

Функции компонентов:

• картофельный настой и пептон служат источниками углерода, азота и аминокислот с длинной цепью;
• глицерин и обогащение кровью обеспечивают дополнительные питательные вещества;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие.

Инкубацию проводят во влажной камере при относительной влажности 60 % и температуре 37 °C до 7 суток. Перед использованием среду нельзя пересушивать.

Через 40 ч колонии B. pertussis имеют гладкую, выпуклую, блестящую поверхность и зону гемолиза. Некоторые штаммы Bordetella не обладают гемолитическими свойствами. Для подтверждения результата необходимо выполнить серодиагностику и биохимические тесты.

Для повышения селективности среды в отношении Bordetella могут применяться антибиотики:

• пенициллин;
• метициллин;
• цефалексин.

Цефалексин показал более высокую эффективность: он подавляет сопутствующую носоглоточную микрофлору и значительно повышает частоту выделения видов Bordetella. Цефалексин применяют в концентрации 40 мг/л; соответствующая селективная добавка имеет код FD004.

В качестве противогрибкового агента в среду можно добавлять амфотерицин B в концентрации 10 мкг/мл.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 36,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина.
2. Нагрейте суспензию до кипения и полностью растворите среду.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует примерно 0,10 МПа, при температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 15–20 % свежей стерильной дефибринированной крови овцы, кролика, человека или лошади.
6. Для повышения селективности асептически добавьте регидратированное содержимое двух флаконов селективной добавки Bos, код FD004.
7. Тщательно перемешайте, не допуская включения пузырьков воздуха.
8. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Работа с клиническими образцами

Тип образца

Клинические образцы:

• фарингеальные экстракты;
• носоглоточный секрет;
• мазки из передних отделов носа.

Сбор и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами соблюдайте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Методика выделения B. pertussis

1. Для выделения B. pertussis из образцов используйте стандартные процедуры.
2. Инкубируйте чашки во влажной камере при 35–37 °C в течение 7 суток.
3. Ежедневно исследуйте чашки для выявления B. pertussis. Осмотр выполняйте с использованием или без использования препаровального микроскопа при косом освещении.
4. Учитывайте, что колонии плесневых грибов могут маскировать колонии B. pertussis.
5. Стерильным скальпелем или иглой удалите участок агара, содержащий распространяющиеся колонии плесени.
6. Учитывайте, что в течение 2–4 суток колонии B. pertussis могут быть не видны без микроскопа.
7. После 7 суток инкубации чашки можно утилизировать как отрицательные.

Некоторые виды Haemophilus способны расти на средах для выделения Bordetella и перекрёстно реагировать с антисыворотками к B. pertussis. Может потребоваться исключение зависимости роста от факторов X и V.

Контроль качества

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с г