Основа агара Борде-Жангу с 1,6% агара HiMedia M175A-500G (уп/500 гр)

Сухая питательная среда Основа агара Борде-Жангу с 1,6% агара HiMedia M175A-500G (уп/500 гр) производства HiMedia. Рекомендуется для детекции и изоляции Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis, а также для использования в методе «кашлевой пластинки» при диагностике коклюша.

Принцип измерения и интерпретация

Среда была разработана Борде и Жангу для культивирования видов Bordetella. Основа агара Борде-Жангу с 1,6% агара идентична по составу стандартной основе, за исключением концентрации агара.

Bordetella pertussis является возбудителем коклюша; с помощью метода «кашлевой пластинки» данный микроорганизм может быть изолирован из экстрактов глотки, носоглоточных секретов и преназальных мазков. Модификация среды путем замены 50 % человеческой или кроличьей крови на 15 % крови овцы делает среду более обогащенной для детекции B. pertussis благодаря гемолитической реакции. Обогащение базовой среды 25 % человеческой кровью способствует обнаружению видов Mycobacterium при малых посевных дозах мокроты и используется при тестировании чувствительности к стрептомицину.

Среда высокопитательна, что обеспечивает обильный рост видов Bordetella. Она также применяется для массового культивирования B. pertussis при производстве вакцин и для поддержания стоковых культур. Настой картофеля и пептон служат источниками углерода, азота и длинноцепочечных аминокислот, а глицерин и кровь обеспечивают дополнительное питание. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс.

Инкубацию следует проводить в увлажненной камере (влажность 60 %) при 37 °C до 7 суток. Среду нельзя пересушивать перед использованием. Через 40 часов колонии B. pertussis выглядят гладкими, выпуклыми, блестящими с зоной гемолиза (некоторые штаммы Bordetella не обладают гемолитической активностью). Для подтверждения результатов необходимо проведение серодиагностики и биохимических тестов.

Селективность среды для Bordetella может быть повышена путем добавления антибиотиков: пенициллина, метициллина или цефалексина (последний является наиболее эффективным). Цефалексин в концентрации 40 мг/л подавляет нежелательный рост микрофлоры носоглотки и значительно увеличивает частоту изоляции видов Bordetella. В качестве противогрибкового агента может быть добавлен Амфотерицин B (10 мкг/мл).

Методика проведения анализа

Подготовка образцов

Для изоляции B. pertussis из клинических образцов (экстракты глотки, носоглоточные секреции, преназальные мазки) используйте стандартные процедуры сбора и обработки материалов согласно установленным руководствам.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 36,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C и давлении $\approx$0,1 МПа (15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 15–20 % стерильной свежей дефибринированной крови (овцы, кролика, человека или лошади).
6. Для повышения селективности асептически добавьте содержимое двух флаконов селективной добавки Bos Selective Supplement (FD004).
7. Тщательно перемешайте, избегая образования пузырьков воздуха, и разлейте по стерильным чашкам Петри.

Инкубация и оценка

1. Инкубируйте чашки в увлажненной камере при 35–37 °C в течение 7 дней.
2. Проводите ежедневный осмотр (возможно с использованием диссекционного микроскопа и косого освещения).
3. При наличии плесневых грибов, маскирующих колонии B. pertussis, удалите часть агара с разрастающимися колониями плесени стерильным скальпелем или иглой.
4. Учитывайте, что колонии B. pertussis могут быть не видны без микроскопа в течение первых 2–4 дней.
5. Через 7 дней инкубации образцы, не давшие роста, считаются отрицательными.

Технические характеристики

Состав, г/л:

• Конечный pH (при 25 °C): 6,7 $\pm$ 0,2
• Внешний вид: однородный свободнотекущий порошок от кремового до желтого цвета
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,6 % агаром
• Цвет и прозрачность базовой среды: светло-желтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель
• Цвет после добавления 15–20 % крови: вишнево-красный непрозрачный гель
• pH: 6,50–6,90

Дополнительные параметры

Контроль качества

Культуральные характеристики определены при добавлении 15–20 % стерильной свежей дефибринированной крови и селективной добавки Bos Selective Supplement (FD004) после инкубации при 35–37 °C в течение 3–4 суток.

Ограничения применения

• Некоторые виды Haemophilus могут расти на данной среде и давать перекрестную реакцию с антисыворотками к B. pertussis. Рекомендуется проверить зависимость от факторов X и V.
• Колонии B. pertussis могут быть не видны без микроскопа в течение 2–4 дней.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

• Только для диагностики in vitro и профессионального использования.
• При работе использовать защитные перчатки, одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдать правила микробиологической безопасности при работе с клиническими образцами.
• Утилизация: загрязненные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией.

Сертификация

• Сертификат: ФСЗ 2009/03709