Основа агара Борде-Жангу HiMedia M175-500G (уп/500 гр)

Основа питательной среды «Основа агара Борде-Жангу HiMedia M175-500G (уп/500 гр)» производства HiMedia — порошкообразная основа агара Борде—Жангу без ростовых добавок. Применяется для обнаружения и выделения Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis из клинических образцов, включая посев методом кашлевых пластинок, с возможностью селективного применения добавки FD004.

Назначение

Рекомендуется для обнаружения и выделения культур Bordetella pertussis и Bordetella parapertussis. Среда предназначена для профессионального применения в микробиологических и клинико-диагностических лабораториях при исследовании:

• глоточных экстрактов;
• носоглоточных выделений;
• мазков из передних отделов носа.

Среда может применяться при подозрении на коклюш, в том числе для посева методом кашлевых пластинок.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: M175-500G
• Наименование: Bordet Gengou Agar Base — основа агара Борде—Жангу
• Тип питательной среды: диагностический
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Форма выпуска: порошок
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: HDPE (полиэтилен высокой плотности)
• Происхождение: животное
• Масса: 500 г
• Сертификат: ФСЗ 2009/03709
• Конечный pH при 25 °C: 6,7 ± 0,2

Состав

Формула рассчитана и стандартизирована для обеспечения заявленных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Среда Борде—Жангу первоначально разработана Борде и Жангу для культивирования видов Bordetella. Bordetella pertussis является возбудителем коклюша; с использованием техники кашлевых пластинок B. pertussis может быть выделена из глоточных экстрактов, носоглоточных выделений и мазков из передних отделов носа.

Кендрик и Элдеринг модифицировали исходную среду, заменив 50 % человеческой или кроличьей крови на 15 % бараньей крови. Это повысило обогащение среды и облегчило обнаружение B. pertussis по гемолитической реакции. Обогащение базовой среды 25 % человеческой крови способствует обнаружению видов Mycobacterium при внесении небольшого количества мокроты и применяется при тестировании чувствительности к стрептомицину.

Среда обладает высокой питательной ценностью, поддерживает обильный рост видов Bordetella, а также может применяться для массового культивирования B. pertussis при производстве вакцин и для поддержания запасных культур.

Функции компонентов:

• картофельный настой и пептон служат источниками углерода, азота и аминокислот;
• глицерин и обогащение кровью обеспечивают дополнительные питательные вещества;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие.

Инкубацию проводят во влажной камере при относительной влажности 60 % и температуре 37 °C в течение до 7 суток. Перед использованием среду нельзя пересушивать.

Через 40 ч колонии B. pertussis обычно имеют гладкую, приподнятую, блестящую поверхность и зону гемолиза. Некоторые штаммы Bordetella не проявляют гемолитической активности. Для подтверждения проводят серодиагностику и биохимические тесты.

Селективность среды для Bordetella может быть повышена добавлением антибиотиков:

• пенициллина;
• метициллина;
• цефалексина.

Цефалексин показал более высокую эффективность среди перечисленных антибиотиков: он подавляет сопутствующий рост носоглоточной микрофлоры и существенно увеличивает частоту выделения видов Bordetella. Цефалексин применяют в концентрации 40 мг/л; соответствующая селективная добавка — FD004. В качестве противогрибкового агента в среду можно добавлять амфотерицин B в концентрации 10 мкг/мл.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 40,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм, что соответствует примерно 0,103 МПа, при температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 15–20 % стерильной свежей дефибринированной крови — бараньей, кроличьей, человеческой или лошадиной.
6. Для придания селективности асептически добавьте восстановленное содержимое 2 флаконов селективной добавки для бордетелл FD004.
7. Тщательно перемешайте, избегая включения пузырьков воздуха.
8. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Методика выделения Bordetella pertussis

Для выделения B. pertussis из образцов используют стандартные процедуры.

1. Инкубируйте чашки во влажной камере при 35–37 °C в течение 7 суток.
2. Ежедневно осматривайте чашки, при необходимости используя микроскоп для препарирования с косым освещением, чтобы выявить наличие B. pertussis.
3. Учитывайте, что сопутствующие колонии плесневых грибов могут маскировать колонии B. pertussis.
4. Стерильным скальпелем или иглой удалите участок агара, содержащий распространяющиеся колонии плесени.
5. Принимайте во внимание, что колонии B. pertussis могут быть не видны без микроскопа в течение 2–4 суток.
6. По истечении 7 суток инкубации чашки можно утилизировать как отрицательные.

Некоторые виды Haemophilus способны расти на средах для выделения Bordetella и перекрёстно реагировать с антисыворотками к B. pertussis. Целесообразно исключить зависимость роста от факторов X и V.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 2,0 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-жёлтого цвета.
• После добавления глицерина и 15 % об./об. стерильной дефибринированной крови: в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.

Реакция

Реакция 4 % масс./об. водного раствора при 25 °C.

• pH: 6,7 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,50–6,90

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления глицерина, 15 % об./об. стерильной дефибринированной крови и селективной добавки для бордетелл FD004, после инкубации при 35–37 °C в течение 3–4 суток.

* Соответствующие номера WDCM.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методики обращения с образцами согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения

1. Некоторые виды Haemophilus растут на средах для выделения Bordetella и перекрёстно реагируют с антисыворотками к B. pertussis.
2. Колонии B. pertussis могут быть не видны без микроскопа в течение 2–4 суток.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения порошка: 10–30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия плотно закрывайте флакон и храните продукт в сухом виде.
• Из-за гигроскопичности порошка необходимо предотвращать образование комков.
• Неправильное хранение может привести к комкованию продукта.
• Храните продукт в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования плотно закрывайте контейнер.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение установлен