HiMedia M1742-500G Основа агара с цетримидом (с 1.3% агара)

Питательная среда HiMedia M1742-500G Основа агара с цетримидом (с 1.3% агара) производства HiMedia содержит 1,3 % агара и предназначена для селективного выделения Pseudomonas aeruginosa. Среда применяется для исследования клинических образцов, включая гной и мочу, а также для оценки образования флуоресцеина и пиоцианина; некоторые штаммы Pseudomonas могут демонстрировать слабый рост из-за токсичности цетримида.

Назначение

Основа агара с цетримидом предназначена для селективного выделения Pseudomonas aeruginosa из различных материалов. Среда может применяться для определения способности микроорганизмов образовывать флуоресцеин и пиоцианин.

Основной тип образцов:

• Клинические образцы: гной, моча.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих характеристик.

• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2.
• Концентрация агара: 1,3 %.

Состав среды аналогичен составам, приведённым в ряде фармакопей, за исключением концентрации агара 1,3 %. Исходная формула описана King и соавторами.

Принцип действия и интерпретация

Цетримид — N-ацетил-N,N,N-триметиламмоний бромид — действует как селективный агент, подавляющий рост бактерий, отличных от Pseudomonas aeruginosa. Цетримид является четвертичной аммониевой солью и катионным моющим веществом, которое:

• снижает поверхностное натяжение в месте контакта;
• оказывает осаждающее, комплексообразующее и денатурирующее действие на белки бактериальной мембраны;
• подавляет широкий спектр микроорганизмов, включая виды Pseudomonas, отличные от Pseudomonas aeruginosa.

Хлорид магния и сульфат калия, входящие в состав среды, усиливают образование пиоцианина — сине-зелёного пигмента, диффундирующего в среду, что облегчает обнаружение Pseudomonas. Ионы магния также могут нейтрализовать ЭДТА, если она присутствует в исследуемом образце.

Желатиновый пептон обеспечивает Pseudomonas необходимыми питательными веществами. Глицерин служит медленно и непрерывно высвобождаемым источником углерода для растущих клеток.

Среда A, разработанная King, Ward и Raney, предназначалась для усиления образования пиоцианина у Pseudomonas. Цетримидный агар, разработанный Lowbury, представляет собой модификацию технического агара — среды A — с добавлением 0,1 % цетриимида для селективного выделения P. aeruginosa. Позднее, после появления высокоочищенного цетримиду, его концентрация в среде была снижена.

Инкубацию проводят при 37 °C в течение 18–24 ч. P. aeruginosa идентифицируют по характерному образованию пиоцианина — синего, водорастворимого, нефлуоресцирующего феназинового пигмента — в сочетании с морфологией колоний и характерным виноградным запахом аминоацетофенона.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию из 44,7 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Простерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунтов/кв. дюйм, что соответствует примерно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. При необходимости асептически добавьте в 1000 мл среды регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки NA Selective Supplement (FD130).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Пробоподготовка и посев

Для выделения P. aeruginosa чашки с цетримидным агаром следует инокулировать из неселективной среды, например:

• бульона Brain Heart Infusion (M210);
• среды Soyabean Casein Digest (M011).

При высокой концентрации микроорганизмов исследуемый образец можно непосредственно инокулировать на цетримидный агар.

Колонии P. aeruginosa могут быть синими, сине-зелёными или непигментированными. Колонии, демонстрирующие флуоресценцию при 250 нм и сине-зелёную пигментацию, считают предположительно положительными.

При кратковременном нахождении культур при комнатной температуре P. aeruginosa может утрачивать флуоресценцию в ультрафиолетовом свете. После повторной инкубации чашек флуоресценция появляется вновь.

Добавление налидиксовой кислоты способствует подавлению роста сопутствующей микрофлоры.

Обращение с образцами

При работе с клиническими образцами применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным лабораторным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо простерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения

1. Некоторые штаммы видов Pseudomonas, отличных от P. aeruginosa, могут демонстрировать слабый рост, поскольку цетримид обладает высокой токсичностью.
2. Для окончательной идентификации необходимо провести дополнительные биохимические и серологические исследования.

Контроль качества

Внешний вид

Кремовый или жёлтый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с гелем, содержащим 1,3 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется гель светло-янтарного цвета с опалесценцией и небольшим осадком.

Реакция

Реакция 4,47 % масс./об. водного раствора, содержащего 1,0 % глицерина, при 25 °C:

• pH: 7,0 ± 0,2.

Диапазон pH

• pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления селективной добавки NA Selective Supplement (FD130) и инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.