HiMedia M1742-100G Основа агара с цетримидом (с 1.3% агара)

Питательная селективная среда HiMedia M1742-100G Основа агара с цетримидом (с 1,3 % агара) производства HiMedia в порошкообразной форме предназначена для выделения Pseudomonas aeruginosa. Основа используется для микробиологического анализа клинических образцов, включая гной и мочу, при хранении продукта при 10–30 °C и ограничении применения для профессиональной диагностики вне организма.

Назначение

Основа агара с цетримидом рекомендована для селективного выделения Pseudomonas aeruginosa из различных материалов. Среда также применяется для определения способности микроорганизмов образовывать флуоресцеин и пиоцианин.

Тип образца: клинические образцы — гной, моча.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Конечный показатель pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация результатов

Основа агара с цетримидом и 1,3 % агара представляет собой селективную среду для выделения Pseudomonas aeruginosa. По составу среда аналогична составам, приведённым в ряде фармакопей, но содержит 1,3 % агара. Исходная формула описана King и соавторами.

Цетримид — четвертичная аммониевая соль и катионное поверхностно-активное вещество — снижает поверхностное натяжение в месте контакта, а также оказывает осаждающее, комплексообразующее и денатурирующее действие на белки бактериальной мембраны. Цетримид подавляет рост бактерий, отличных от Pseudomonas aeruginosa, включая широкий спектр микроорганизмов и виды рода Pseudomonas, не относящиеся к Pseudomonas aeruginosa.

Хлорид магния и сульфат калия, входящие в состав среды, усиливают образование пиоцианина — сине-зелёного пигмента, диффундирующего в среду, что облегчает обнаружение Pseudomonas. Ионы магния также могут нейтрализовать ЭДТА, если это соединение присутствует в образце. Желатиновый пептон обеспечивает Pseudomonas необходимыми питательными веществами, а глицерин служит медленно и непрерывно потребляемым источником углерода для растущих клеток.

Среда A, разработанная King, Ward и Raney, предназначалась для усиления образования пиоцианина у Pseudomonas. Цетримидный агар, разработанный Lowbury, является модификацией технического агара — среды A — с добавлением 0,1 % цетриamiда для селективного выделения P. aeruginosa. Позднее, после появления высокоочищенного цетриamiда, его концентрацию в среде снизили.

Инкубацию проводят при 37 °C в течение 18–24 ч. P. aeruginosa идентифицируют по характерному образованию пиоцианина — синего, водорастворимого нефлуоресцирующего феназинового пигмента — в совокупности с морфологией колоний и характерным виноградным запахом аминоацетофенона.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 44,7 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите приготовленную среду до 45–50 °C.
5. При необходимости асептически добавьте содержимое 1 флакона селективной добавки NA (FD130) к 1000 мл среды.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Посев и интерпретация

Для выделения P. aeruginosa чашки с цетримидным агаром следует инокулировать из неселективной среды, например бульона на основе мозгово-сердечной вытяжки (M210) или соево-казеиновой переваренной среды (M011).

При высокой концентрации микроорганизмов исследуемый образец можно непосредственно наносить на цетримидный агар.

Колонии P. aeruginosa могут иметь синий, сине-зелёный цвет или не образовывать пигмент. Колонии с флуоресценцией при 250 нм и сине-зелёной пигментацией рассматриваются как предположительно положительные.

P. aeruginosa может терять флуоресценцию в ультрафиолетовом свете, если культуры непродолжительное время находятся при комнатной температуре. После повторной инкубации чашек флуоресценция появляется снова.

Для подавления роста сопутствующей микрофлоры может применяться добавление налидиксовой кислоты.

Обращение с образцами и меры безопасности

При работе с клиническими образцами соблюдайте соответствующие методики обращения с материалом согласно установленным лабораторным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Применение: только для профессиональной диагностики вне организма.

Перед открытием контейнера прочитайте маркировку. При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица. Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики. При работе с клиническими образцами необходимо соблюдать стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам. Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения

1. Некоторые штаммы Pseudomonas, не относящиеся к виду Pseudomonas aeruginosa, могут расти слабо, поскольку цетримид обладает высокой токсичностью.
2. Для полной идентификации необходимо дополнительно провести биохимические и серологические исследования.

Контроль качества

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с гелем, содержащим 1,3 % агара.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: гель светло-янтарного цвета, опалесцирующий, с небольшим осадком в чашках Петри.

Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 4,47 % масс./объём, содержащего 1,0 % глицерина, при 25 °C.

pH: 6,80–7,20.

Заявленный pH: 7,0 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации приготовленной среды с добавленной селективной добавкой NA (FD130) при 35–37 °C в течение 24–48 ч.