HiMedia M173-5KG Агар Мюллера-Хинтона

Питательная агаровая среда HiMedia M173-5KG Агар Мюллера–Хинтона производства HiMedia представляет собой порошок массой 5 кг. Среда предназначена для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам в чистых культурах, выделенных из клинических образцов.

Назначение

Агар Мюллера–Хинтона HiMedia M173-5KG применяют для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам, выделенных из клинических образцов. Среда используется преимущественно в диско-диффузионном методе определения чувствительности бактерий.

Тип образца: клинические образцы — чистые культуры, выделенные из мочи, кала, крови и других материалов.

Состав

Формула рассчитана и стандартизирована для соответствия параметрам эксплуатационных характеристик.

# Эквивалент настоя из говяжьего сердца.

## Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,1.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 38,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Среда Мюллера–Хинтона первоначально была разработана как простая прозрачная агаровая среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Впоследствии для культивирования патогенных видов Neisseria были разработаны другие среды, однако агар Мюллера–Хинтона получил широкое применение для определения устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфонамидам.

В настоящее время агар Мюллера–Хинтона используют как тестовую среду для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Среда предназначена для диффузии антимикробных препаратов, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель.

Среда применяется для определения чувствительности по следующим причинам:

1. Обеспечивает хорошую воспроизводимость результатов испытаний чувствительности от партии к партии.
2. Содержит низкие концентрации ингибиторов сульфонамидов, триметоприма и тетрациклина.
3. Поддерживает рост большинства неприхотливых патогенных бактерий.
4. Для среды накоплены значительный объём данных и практический опыт применения.

Кирби–Бауэр и соавторы рекомендовали эту среду для проведения тестов чувствительности к антибиотикам с использованием одного диска с высокой концентрацией препарата. Комитет Всемирной организации здравоохранения по стандартизации испытаний чувствительности принял агар Мюллера–Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов.

Агар Мюллера–Хинтона с добавлением 5 % крови лошади и агар Мюллера–Хинтона с гемоглобином рекомендованы для определения чувствительности к антимикробным препаратам Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae.

Настой HM B и ациказа обеспечивают среду азотсодержащими соединениями, углеродом, серой и другими необходимыми питательными веществами. Крахмал действует как защитный коллоид, связывающий токсичные вещества, присутствующие в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина, что определяется по значениям минимальной ингибирующей концентрации для Enterococcus faecalis при использовании комбинации сульфаметоксазола и триметоприма (SXT).

Методика Кирби–Бауэра

Методика основана на диффузии антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, в агаровый гель. Используют диски с одной концентрацией антимикробного препарата; измеренные диаметры зон подавления роста сопоставляют со значениями минимальной ингибирующей концентрации.

1. Приготовьте стандартизованную суспензию исследуемого микроорганизма.
2. Равномерно нанесите суспензию тампоном на всю поверхность питательной среды.
3. Разместите на поверхности среды бумажные диски, пропитанные заданным количеством антимикробных препаратов.
4. Инкубируйте посевы.
5. Измерьте зоны подавления роста вокруг каждого диска.
6. Определите чувствительность сравнением результатов с критериями CLSI — Института клинических и лабораторных стандартов.

На результаты диско-диффузионного определения чувствительности влияют:

• глубина слоя агара;
• активность диска;
• концентрация посевного материала;
• pH среды;
• продукция β-лактамазы исследуемыми микроорганизмами.

Агар Мюллера–Хинтона не предназначен для диско-диффузионного определения чувствительности медленно растущих микроорганизмов, анаэробов и капнофилов. При медленном росте увеличение времени инкубации может привести к разрушению диффундирующего антибиотика и получению неточных результатов.

Требования к образцам и обращению

При работе с клиническими образцами применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами. После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Среда рекомендована только для определения чувствительности чистых культур.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Среда рекомендована только для определения чувствительности чистых культур.
2. Плотность посевного материала влияет на размер зоны подавления роста: слишком высокая плотность может привести к уменьшению зон, а слишком низкая — к их увеличению.
3. Неприхотливые микроорганизмы могут не расти на этой среде; для них может потребоваться добавление крови.
4. Неприхотливые анаэробы могут не расти на этой среде.
5. Поскольку определение чувствительности проводят с использованием дисков с антибиотиками, необходимо соблюдать требования к хранению дисков; неправильное хранение может изменить активность препарата.
6. В отдельных случаях результаты определения чувствительности in vitro могут не совпадать с результатами действия препарата in vivo.

Контроль качества

Ожидаемые характеристики среды обеспечиваются при приготовлении по инструкции на этикетке, использовании до истечения срока годности и хранении при рекомендованной температуре.

Внешний вид порошка: однородный, сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,7%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 3,8 % масс./об. при 25 °C; pH 7,3 ± 0,1.

Диапазон pH: 7,20–7,40.

Испытания чувствительности к антибиотикам выполняют в соответствии с действующим документом ISO/TS 16782; среда должна соответствовать установленным критериям приемлемости. Эксплуатационные характеристики среды проверяют в соответствии с руководствами CLSI и EUCAST.

Испытания для Streptococcus pneumoniae

Среду дополняют 5 % крови лошади и 20 мг/л НАД, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Испытания для Haemophilus influenzae

Среду дополняют 5 % крови лошади и 20 мг/л НАД, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Испытание чувствительности к антибиотикам

Различные диски испытывают со стандартными штаммами ATCC. Зоны подавления роста измеряют после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч в соответствии с актуальным протоколом CLSI M6 и стандартом CLSI M100.

Содержание тимина и тимидина

Размеры зон для указанных дисков характеризуют содержание тимина и тимидина в среде.

Содержание двухвалентных катионов

Размеры зон для указанных дисков характеризуют содержание двухвалентных катионов в среде.