Питательная агаровая среда HiMedia M173-2.5KG Агар Мюллера—Хинтона производства HiMedia для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Применяется для чистых культур, выделенных из клинических образцов, методом дисковой диффузии; рабочий диапазон pH готовой среды составляет 7,20–7,40.

Назначение

Агар Мюллера—Хинтона рекомендуется для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам, выделенных из клинических образцов.

Тип образца: чистые культуры, выделенные из мочи, кала, крови и других клинических материалов.

Среда предназначена только для диагностического применения in vitro и профессионального использования.

Состав

Состав рассчитан и стандартизирован для обеспечения заявленных рабочих характеристик.

Эквивалент настоя говяжьего сердца.

Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,1.

Принцип действия и интерпретация

Формула агара Мюллера—Хинтона первоначально была разработана как простая прозрачная агаровая среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Позднее для культивирования патогенных видов Neisseria были разработаны другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение при определении устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфонамидам.

В настоящее время агар Мюллера—Хинтона используется как тестовая среда для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Среда рекомендована для диффузии антимикробных препаратов, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель в соответствии с утверждённым стандартом CLSI.

Среда применяется в тестировании чувствительности по следующим причинам:

1. Обеспечивает хорошую воспроизводимость результатов определения чувствительности от партии к партии.
2. Содержит низкие концентрации ингибиторов сульфонамидов, триметоприма и тетрациклина.
3. Поддерживает рост большинства неприхотливых патогенных бактерий.
4. Для среды накоплены значительный объём данных и практический опыт применения.

Kirby—Bauer рекомендовали агар Мюллера—Хинтона для проведения тестов чувствительности к антибиотикам с использованием одного диска с высокой концентрацией препарата. Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера—Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов.

Агар Мюллера—Хинтона с добавлением 5 % крови овцы и агар Мюллера—Хинтона с гемоглобином рекомендованы для определения чувствительности Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae к антимикробным препаратам.

Настой HM B и Acicase обеспечивают среду азотсодержащими соединениями, углеродом, серой и другими необходимыми питательными веществами. Крахмал действует как защитный коллоид против токсичных веществ, присутствующих в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина, определяемым по значениям минимальной ингибирующей концентрации для Enterococcus faecalis при применении сульфаметоксазола/триметоприма (SXT).

Методика дисковой диффузии Kirby—Bauer

Метод Kirby—Bauer основан на диффузии антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, в агаровую среду. Для метода применяют диски с одной концентрацией антимикробного препарата; измеряемые диаметры зон задержки роста сопоставляют со значениями минимальной ингибирующей концентрации (МИК).

1. Приготовьте стандартизованную суспензию исследуемого микроорганизма.
2. Равномерно нанесите суспензию тампоном на всю поверхность питательной среды.
3. Разместите на поверхности среды бумажные диски, содержащие определённые количества антимикробных препаратов.
4. Инкубируйте посевы.
5. Измерьте зоны задержки роста вокруг каждого диска.
6. Определите чувствительность путём сравнения полученных диаметров с критериями CLSI.

На результаты диско-диффузионного теста влияют глубина агарового слоя, активность диска, концентрация инокулята, pH среды и продукция β-лактамазы тестируемыми микроорганизмами.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 38,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм², что соответствует примерно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Рабочие характеристики партии проверены и стандартизированы в соответствии с актуальным документом CLSI, ранее обозначавшимся как NCCLS, по протоколам оценки сухого агара Мюллера—Хинтона.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид порошка

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,7 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность готовой среды

Цвет и прозрачность: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Реакция среды

Реакция: водный раствор с концентрацией 3,8 % масс./объём при 25 °C.

pH: 7,20–7,40.

Культуральные и контрольные характеристики

Тесты чувствительности к антибиотикам выполняют в соответствии с актуальным стандартом ISO/TS 16782; среда должна соответствовать установленным пределам приемлемости. Рабочие характеристики среды проверяют в соответствии с руководствами CLSI и EUCAST.

Для тестирования Streptococcus pneumoniae среду дополняют 5 % крови лошади и 20 мг/л НАД, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Для тестирования Haemophilus influenzae среду дополняют 5 % крови лошади и 20 мг/л НАД, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Тест чувствительности к антибиотикам

Различные диски испытывают на стандартных штаммах ATCC. Диаметры зон задержки роста измеряют после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч в соответствии с актуальными протоколом CLSI M6 и стандартом CLSI M100.

Зоны вокруг дисков, отмеченных символом #, используются для оценки содержания тимина и тимидина в среде.

Зоны вокруг дисков, отмеченных символом $, используются для оценки содержания двухвалентных катионов в среде.