Питательная агаровая среда HiMedia M173-10KG Агар Мюллера–Хинтона производства HiMedia для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам; масса упаковки 10 кг. Применяется для исследования чистых культур, выделенных из клинических образцов, методом дисковой диффузии в диапазоне pH 7,3 ± 0,1.

Назначение

Агар Мюллера–Хинтона предназначен для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам, выделенных из клинических образцов. Типы образцов: чистые культуры, выделенные из мочи, кала, крови и других клинических материалов.

Среда применяется для диффузии антимикробных препаратов, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель. Метод используют при определении чувствительности бактерий к антибиотикам и сопоставлении диаметров зон ингибирования с минимальными подавляющими концентрациями (МПК).

Состав

Эквивалент настоя из говяжьего сердца.

Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Принцип действия и интерпретация

Изначально формула агара Мюллера–Хинтона была разработана как простая прозрачная агаровая среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Позднее для культивирования патогенных видов Neisseria были разработаны другие среды, однако агар Мюллера–Хинтона получил широкое применение для определения устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфаниламидам.

В настоящее время агар Мюллера–Хинтона используют как тестовую среду для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Среда предназначена для диффузии антимикробных препаратов, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель в соответствии с утверждёнными стандартами CLSI.

Среда выбрана для тестирования чувствительности по следующим техническим причинам:

1. Обеспечивает хорошую воспроизводимость результатов между партиями при исследовании чувствительности.
2. Содержит низкие концентрации ингибиторов сульфаниламида, триметоприма и тетрациклина.
3. Поддерживает рост большинства неприхотливых патогенных бактерий.
4. Для среды накоплены значительный объём данных и практический опыт применения.

Методика Кирби–Бауэра основана на диффузии антимикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, в агаровую среду. Метод предусматривает использование диска с одной концентрацией антимикробного препарата; измеренные диаметры зон ингибирования коррелируют со значениями минимальной подавляющей концентрации (МПК).

Настандартизированную суспензию микроорганизма распределяют тампоном по всей поверхности среды. Затем на поверхность среды помещают бумажные диски с определённым количеством антимикробных препаратов, проводят инкубацию и измеряют зоны ингибирования вокруг каждого диска. Чувствительность определяют сравнением полученных результатов со стандартами CLSI.

На результаты диско-диффузионного теста влияют:

• глубина слоя агара;
• активность диска;
• концентрация инокулята;
• pH среды;
• продукция β-лактамазы исследуемыми микроорганизмами.

Комитет ВОЗ по стандартизации тестирования чувствительности принял агар Мюллера–Хинтона для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов. Агар Мюллера–Хинтона с добавлением 5 % крови овцы и агар Мюллера–Хинтона с гемоглобином рекомендованы для определения чувствительности Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae к антимикробным препаратам.

Настой HM B и Acicase обеспечивают среду азотистыми соединениями, углеродом, серой и другими необходимыми питательными веществами. Крахмал действует как защитный коллоид, связывающий токсичные вещества, присутствующие в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты подобраны с низким содержанием тимина и тимидина, определяемым по значениям МПК для Enterococcus faecalis при использовании сульфаметоксазола/триметоприма (SXT).

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 38,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Рабочие характеристики партии проверены и стандартизированы в соответствии с действующим документом CLSI, ранее обозначавшимся как NCCLS, M6, по протоколам оценки сухого агара Мюллера–Хинтона.

Ограничения применения

1. Среда предназначена только для тестирования чувствительности чистых культур.
2. Плотность инокулята влияет на размер зоны ингибирования: слишком плотный инокулят может привести к уменьшению зон, а слишком низкая концентрация инокулята — к увеличению зон.
3. Требовательные микроорганизмы могут не расти на этой среде и нуждаться в добавлении крови.
4. Требовательные анаэробы могут не расти на этой среде.
5. Поскольку определение чувствительности проводится с использованием антибиотических дисков, необходимо обеспечить правильное хранение дисков; нарушение условий хранения может изменить их активность.
6. При определённых обстоятельствах результаты определения чувствительности in vitro могут не соответствовать результатам in vivo.
7. Агар Мюллера–Хинтона не подходит для диско-диффузионного определения чувствительности медленно растущих микроорганизмов, анаэробов и капнофилов.
8. При медленном росте увеличение времени инкубации может привести к разрушению диффундирующего антибиотика и получению неточных результатов.

Тип образца и обращение с ним

Для клинических образцов необходимо применять соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Контроль качества и оценка характеристик

Ожидаемые характеристики среды обеспечиваются при приготовлении согласно инструкции на этикетке, использовании до истечения срока годности и хранении при рекомендованной температуре.

Внешний вид порошка

Внешний вид: однородный, свободно текучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,7 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность готовой среды

Цвет и прозрачность: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Реакция среды

Реакция: для водного раствора с концентрацией 3,8 % масс./об. при 25 °C.

pH: 7,3 ± 0,1.

Диапазон pH: 7,20–7,40.

Условия для Streptococcus pneumoniae

Среду дополняют 5 % крови лошади и 20 мг/л NAD, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Условия для Haemophilus influenzae

Среду дополняют 5 % крови лошади и 20 мг/л NAD, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Тест на чувствительность к антибиотикам

Для стандартных штаммов ATCC тестируют различные диски и измеряют зоны ингибирования после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч. Исследование проводят согласно последнему протоколу CLSI M6 и действующему стандарту CLSI M100.

Содержание тимина и тимидина

Размеры зон для указанных дисков служат показателем содержания тимина и тимидина в среде.

Содержание двухвалентных катионов

Размеры зон для указанных дисков служат показателем содержания двухвалентных катионов в среде.

Антибиотикочувствительность определяют в соответствии с действующими требованиями ISO/TS 16782. Рабочие характеристики среды проверяют согласно руководствам CLSI и EUCAST.