HiMedia M173-100G Агар Мюллера-Хинтона

Питательная агаризованная среда HiMedia M173-100G Агар Мюллера—Хинтона производства HiMedia предназначена для определения чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам. Применяется для исследования чистых культур, выделенных из клинических образцов, методом дисковой диффузии; масса упаковки — 100 г.

Назначение

Агар Мюллера—Хинтона HiMedia M173-100G рекомендован для определения чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам, выделенных из клинических образцов.

Тип образца: клинические образцы — чистые культуры, выделенные из мочи, кала, крови и других материалов.

Среда предназначена только для диагностики in vitro и профессионального применения.

Состав

Расход сухой среды: 38,0 г на 1000 мл воды.

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия установленным рабочим параметрам.

# Эквивалент настоя из говяжьего сердца.

## Эквивалент кислотного гидролизата казеина.

Происхождение сырья: животное.

Физическая форма: порошок.

Тип упаковки: флакон из полиэтилена высокой плотности (HDPE).

Приготовление среды

1. Суспендируйте 38,0 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Среда Мюллера—Хинтона первоначально была разработана как простая прозрачная агаровая среда для культивирования патогенных видов Neisseria. Впоследствии для культивирования патогенных видов Neisseria были разработаны другие среды, однако агар Мюллера—Хинтона получил широкое применение для определения устойчивости гонококков и других микроорганизмов к сульфонамидам.

В настоящее время агар Мюллера—Хинтона используют в качестве тестовой среды для определения чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам. Среда рекомендована для диффузии противомикробных препаратов, нанесённых на бумажные диски, через агаровый гель.

Среда выбрана для испытаний чувствительности по следующим причинам:

1. Обеспечивает хорошую воспроизводимость результатов от партии к партии при определении чувствительности.
2. Содержит низкие концентрации ингибиторов сульфонамида, триметоприма и тетрациклина.
3. Поддерживает рост большинства неприхотливых патогенных бактерий.
4. Для среды накоплены значительный объём данных и практический опыт оценки рабочих характеристик.

Метод Кирби—Бауэра основан на диффузии противомикробных веществ, нанесённых на бумажные диски, в агаровую среду. Используют диск с одной концентрацией противомикробного препарата; измеренный диаметр зоны подавления роста сопоставляют со значениями минимальной подавляющей концентрации (МПК).

Стандартизированную суспензию исследуемого микроорганизма распределяют тампоном по всей поверхности среды. Затем на поверхность помещают бумажные диски с определённым количеством противомикробных препаратов, инкубируют посев и измеряют зоны подавления роста вокруг каждого диска. Чувствительность определяют сравнением полученных результатов с критериями CLSI.

На результаты диско-диффузионного теста влияют:

• глубина слоя агара;
• активность диска;
• концентрация посевного материала;
• pH среды;
• продукция β-лактамазы исследуемыми микроорганизмами.

Метод Кирби—Бауэра с использованием одного диска высокой концентрации рекомендован для проведения тестов чувствительности к антибиотикам. Агар Мюллера—Хинтона принят для определения чувствительности микроорганизмов благодаря воспроизводимости результатов.

Агар Мюллера—Хинтона с добавлением 5 % крови овцы и агар Мюллера—Хинтона с гемоглобином рекомендованы для определения чувствительности Streptococcus pneumoniae и Haemophilus influenzae к противомикробным препаратам.

Настой HM B и ациказ обеспечивают среду азотистыми соединениями, углеродом, серой и другими необходимыми питательными веществами. Крахмал действует как защитный коллоид, связывающий токсичные вещества, присутствующие в среде. При гидролизе крахмала образуется декстроза, служащая источником энергии. Компоненты отобраны с низким содержанием тимина и тимидина, что оценивают по значениям МПК для Enterococcus faecalis при применении сульфаметоксазола и триметоприма (SXT).

Среда не предназначена для определения чувствительности методом дисковой диффузии у медленно растущих микроорганизмов, анаэробов и капнофилов. При медленном росте увеличение времени инкубации может привести к разрушению диффундирующего антибиотика и получению неточных результатов.

Сбор и обработка образцов

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности и правила микробиологической лабораторной практики. Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила микробиологической безопасности при работе с образцами и культурами.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности.

Ограничения применения

1. Среда рекомендована только для тестирования чистых культур.
2. Плотность посевного материала может влиять на размер зоны подавления роста: слишком плотный посев может привести к уменьшению зон, а слишком разреженный — к их увеличению.
3. Требовательные микроорганизмы могут не расти на этой среде; для их культивирования может потребоваться добавление крови.
4. Требовательные анаэробные микроорганизмы могут не расти на этой среде.
5. Поскольку определение чувствительности проводится с использованием антибиотических дисков, необходимо соблюдать условия хранения дисков; нарушение хранения может изменить их активность.
6. В отдельных случаях результаты определения чувствительности in vitro могут не совпадать с результатами in vivo.

Технические характеристики

• Полное название: HiMedia M173-100G Агар Мюллера—Хинтона
• Производитель: HiMedia
• Назначение изделия: агар
• Масса: 100 г
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: HDPE
• Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,1
• Диапазон pH: 7,20–7,40
• Концентрация водного раствора для контроля реакции: 3,8 % масс./об.
• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C
• Условия хранения: плотно закрытый контейнер, сухое проветриваемое помещение, защита от экстремальных температур и источников воспламенения

Контроль качества

Ожидаемые характеристики среды обеспечиваются при приготовлении по инструкции на этикетке, соблюдении рекомендованной температуры хранения и использовании до истечения срока годности.

• Внешний вид: однородный, свободно текучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,7 % агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.
• Реакция: реакция 3,8 % масс./об. водного раствора при 25 °C; pH 7,3 ± 0,1.
• pH: 7,20–7,40.

Антибиотикограммы выполняют в соответствии с действующими требованиями ISO/TS 16782. Рабочие характеристики среды проверяют в соответствии с руководствами CLSI и EUCAST.

Для тестирования Streptococcus pneumoniae среду дополняют 5 % крови лошади и 20 мг/л NAD, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Для тестирования Haemophilus influenzae среду дополняют 5 % крови лошади и 20 мг/л NAD, затем инкубируют при 34–36 °C в течение 18–20 ч в атмосфере с 5 % CO₂.

Тест чувствительности к антибиотикам

Для стандартных штаммов ATCC испытывают различные диски. Зоны подавления роста измеряют после инкубации при 30–35 °C в течение 18 ч в соответствии с последним протоколом CLSI M6 и действующим стандартом CLSI M100.

Содержание тимина и тимидина

Размеры зон для указанных дисков характеризуют содержание тимина и тимидина в среде.

Содержание двухвалентных катионов

Размеры зон для указанных дисков характеризуют содержание двухвалентных катионов в среде.

Культуральные характеристики и зоны подавления роста: