Агар с сердечной вытяжкой и цистином HiMedia M172-500G (уп/500 гр)

Питательная агаровая среда HiMedia M172-500G (уп/500 гр) — порошковая основа с содержанием агара 15,000 г/л для приготовления среды с сердечной вытяжкой и L-цистином. Среда предназначена для культивирования Francisella tularensis после обогащения гемоглобином, а без обогащения поддерживает рост грамотрицательных кокков и других патогенных микроорганизмов.

Назначение и область применения

Среда рекомендована для культивирования Francisella tularensis с обогащением гемоглобином; без обогащающих добавок обеспечивает рост грамотрицательных кокков и других патогенных микроорганизмов.

С добавлением 2 % гемоглобина среда применяется для выделения и культивирования Francisella tularensis. Среда также поддерживает рост многих других микроорганизмов, требовательных к питательным условиям. Возможны дополнительные добавки кроличьей крови и противомикробных веществ.

Среда известна также как агар с цистином, глюкозой и кровью и используется как основа для приготовления питательной среды для выделения Francisella tularensis.

• Тип питательной среды: элективный
• Назначение изделия: агар
• Тип образца: клинические образцы, обогащённые в жидкой питательной среде
• Сертификат: ФСЗ 2009/03707
• Методические документы: МР 02.009-06, Саратов, 2006

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих характеристик.

Эквивалентная характеристика HM infusion solids B∆#: сухие вещества настоя из говяжьего сердца.

• Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2
• Реакция: pH 6,60–7,00 для 5,1 % масс./об. водного раствора при 25 °C

Принцип действия и интерпретация

Francisella tularensis вызывает туляремию — заболевание грызунов и других мелких животных, сходное с чумой. Микроорганизмы являются строгими аэробами. Свежевыделенные культуры не растут на обычных питательных средах и требуют сложной среды, содержащей кровь, тканевые экстракты и цистин.

Для выделения и культивирования Francisella tularensis применялись различные рецептуры. Агар с кровью, декстрозой и цистином, описанный Фрэнсисом, был пригоден для культивирования F. tularensis. Для этой же цели может использоваться агар с сердечной вытяжкой с добавлением 0,05 % цистина и 1 % декстрозы. Последующее добавление гемоглобина в основу агара с цистином и сердечной вытяжкой позволило получить питательную среду для культивирования F. tularensis.

Гемоглобин обеспечивает дополнительные питательные вещества и факторы роста. Без дополнительного обогащения среда поддерживает рост грамотрицательных кокков и других патогенных микроорганизмов. Среда является питательной и может применяться для культивирования многих других микроорганизмов, трудно поддающихся выращиванию.

Функции компонентов:

• Сухие вещества настоя HM B и пептон протеозный: источники углерода, азота, витаминов и минеральных веществ.
• Декстроза: источник энергии.
• L-цистин: источник аминокислот.
• Хлорид натрия: источник необходимых ионов.
• Гемоглобин: источник дополнительных питательных веществ и факторов роста.

Для снижения риска чрезмерного роста загрязняющей микрофлоры в среду допускается внесение пенициллина в концентрации 100–500 единиц/мл.

Francisella tularensis относится к патогенам уровня биобезопасности 2 и может передаваться через аэрозоли или при проникновении через неповреждённую кожу.

Приготовление среды

Приготовление базовой среды

1. Суспендируйте 51,0 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.

Приготовление среды с гемоглобином

1. Для получения обогащённой среды суспендируйте 10,2 г сухой среды в 100 мл дистиллированной воды.
2. Стерилизуйте приготовленную основу автоклавированием при 121 °C в течение 15 мин.
3. Охладите среду до 45–50 °C.
4. В асептических условиях добавьте 100 мл стерильного 2 % раствора гемоглобина.
5. Тщательно перемешайте.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный, свободно сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды:
  • базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель янтарного цвета;
  • после добавления 2 % раствора гемоглобина: непрозрачный гель шоколадно-коричневого цвета в чашках Петри.
• Реакция: pH 6,8 ± 0,2 для 5,1 % масс./об. водного раствора при 25 °C.
• Диапазон pH: 6,60–7,00.

Культуральные характеристики определяют после добавления 2 % гемоглобина и инкубации при 35–37 °C в течение 40–48 ч.

Рабочие характеристики среды ожидаются при приготовлении в соответствии с инструкцией на этикетке, соблюдении рекомендованной температуры хранения и использовании до истечения срока годности.

Ограничения применения

1. Для окончательной идентификации микроорганизмов необходимо провести дополнительные биохимические и серологические исследования.
2. Отдельные микроорганизмы имеют различные требования к условиям роста и могут демонстрировать неодинаковую интенсивность и характер роста на среде.
3. Каждая серия среды протестирована на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа. Для применения с конкретным микроорганизмом, не указанным в сертификате анализа, пользователю рекомендуется предварительно валидировать среду с учётом собственных требований.

Работа с образцами и меры безопасности

При работе с клиническими образцами необходимо применять соответствующие методы обращения с материалом согласно действующим лабораторным руководствам.

Среда предназначена только для диагностики in vitro и профессионального использования.

Перед открыванием контейнера следует ознакомиться с маркировкой. При работе с образцами и культурами необходимо:

• использовать защитные перчатки;
• надевать защитную одежду;
• применять средства защиты глаз и лица;
• соблюдать надлежащие микробиологические лабораторные практики;
• соблюдать стандартные меры предосторожности при работе с клиническими образцами.

Загрязнённые материалы после использования необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Условия хранения: плотно закрытый контейнер, сухое проветриваемое помещение, защита от экстремальных температур и источников воспламенения.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C