Лактозный агар с бриллиантовым зеленым и феноловым красным HiMedia M1693-500G (уп/500 гр)

Питательная селективная среда Лактозный агар с бриллиантовым зеленым и феноловым красным HiMedia M1693-500G (уп/500 гр) предназначена для выделения видов Salmonella из проб воды. Среда применяется после этапов жидкого обогащения, а типичный вид колоний не является достаточным подтверждением присутствия Salmonella и требует биохимической и серологической идентификации.

Назначение

Лактозный агар с бриллиантовым зеленым и феноловым красным HiMedia M1693-500G предназначен для селективного выделения видов Salmonella из проб воды. Твёрдая селективная среда используется после жидких этапов предварительного и селективного обогащения.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,1
• Происхождение компонентов: животного происхождения
• Физическая форма: порошок
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: ПЭВП (полиэтилен высокой плотности)

Приготовление среды

1. Суспендируйте 46,69 г сухой среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагревайте при периодическом перемешивании и доведите почти до кипения, чтобы полностью растворить среду.
3. Не автоклавируйте среду.
4. Охладите приготовленную среду до 50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип применения и интерпретация результатов

Среда разработана по методике Edel и Kampelmacher для селективного выделения видов Salmonella из воды. Применение среды рекомендовано требованиями ISO 6340:1995 и IS 15187:2002.

Для повышения вероятности обнаружения микроорганизмов Salmonella из селективных обогатительных культур следует инокулировать не менее двух различных селективных сред. В схему могут входить:

• лактозный агар с бриллиантовым зелёным и феноловым красным M1693;
• агар XLD M031/M031I;
• бисмут-сульфитный агар M027.

Появление типичных колоний Salmonella на селективной агаризованной среде не является достаточным доказательством присутствия видов Salmonella. Предположительные колонии необходимо пересевать на различные среды для биохимического и серологического подтверждения.

Пробоподготовка и предварительное обогащение проб воды

Пробы воды следует анализировать в течение 24 часов после отбора.

Пробы объёмом более 10 мл

Для проб воды объёмом более 10 мл применяют один из вариантов:

• добавляют пробу к такому же объёму буферной пептонной воды M614/M614S двойной концентрации;
• фильтруют пробу через стерильный мембранный фильтр, после чего помещают фильтр в 50 мл буферной пептонной воды одинарной концентрации.

При необходимости допускается использование средств, облегчающих фильтрацию.

Пробы объёмом 10 мл и менее

Для проб объёмом 10 мл и менее используют не менее 50 мл буферной пептонной воды одинарной концентрации либо объём буферной пептонной воды, как минимум в 10 раз превышающий объём пробы.

Инкубация

Инкубируйте предварительно обогащённые пробы при 36 ± 2 °C в течение 16–20 часов.

Селективное обогащение и высев

1. Для дальнейшего обогащения в селективной среде перенесите 0,1 мл культуры предварительного обогащения в 10 мл либо 1 мл культуры в 100 мл среды с малахитовым зелёным и хлоридом магния — модифицированной среды Раппапорта—Вассилиадиса M1658I, предназначенной для анализа воды.
2. Инкубируйте среду на водяной бане при 42 ± 0,5 °C в течение 18–24 часов.
3. Использование большего объёма посевного материала может повысить вероятность обнаружения микроорганизмов Salmonella.
4. В определённых случаях дополнительно рекомендуется применять селенит-цистиновую среду M025.
5. Перенесите петлю обогатительной среды на лактозный агар с бриллиантовым зелёным и феноловым красным M1693 и агар XLD M031/M031I.
6. Бисмут-сульфитный агар M027 может использоваться как дополнительная селективная среда.
7. При использовании бисмут-сульфитного агара инкубируйте чашки при 36 ± 2 °C в течение 24–48 часов.

Интерпретация колоний и подтверждение Salmonella

Для подтверждения отберите все либо не менее пяти различных типичных колоний Salmonella с каждой положительной агаризованной среды.

Типичные колонии имеют следующие признаки:

• на лактозном агаре с бриллиантовым зелёным и феноловым красным M1693: красные либо слегка розовато-белые, непрозрачные, с красным окружением;
• на агаре XLD: бесцветные, но кажущиеся красными, обычно с чёрным центром;
• на бисмут-сульфитном агаре: чёрные, обычно окружённые металлическим блеском.

Пересев на питательный агар

1. Выполните высев отобранных колоний на поверхность предварительно высушенных чашек с питательным агаром M561A таким образом, чтобы формировались хорошо изолированные колонии.
2. Инкубируйте чашки при 36 ± 2 °C в течение 18–24 часов.
3. Для дальнейшего подтверждения используйте только одиночные изолированные колонии.
4. Исследуйте основные биохимические реакции, подтверждающие виды Salmonella:
   • ферментация лактозы — отрицательная;
   • ферментация глюкозы — положительная;
   • образование сероводорода — положительное;
   • реакция на уреазу — отрицательная;
   • лизиндекарбоксилазная реакция — положительная.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или светло-розовый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется гель зеленовато-коричневого цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий.

Реакция среды

Реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 4,66 % при 25 °C:

• pH: 7,0 ± 0,1.

Диапазон pH

• pH: 6,90–7,10.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Условия хранения и срок годности

• Условия хранения сухой среды: при температуре ниже 30 °C в плотно закрытой упаковке.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: M1693-500G
• Назначение изделия: агар
• Назначение среды: селективное выделение видов Salmonella из проб воды
• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,1
• Физическая форма: порошок
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: ПЭВП (полиэтилен высокой плотности)
• Происхождение: животного происхождения
• Фасовка: 500 г
• Сертификат: ФСЗ 2009/03709

Техническое отличие от аналогичных сред

Для повышения вероятности выявления Salmonella среду M1693 применяют в сочетании как минимум с ещё одной селективной средой, например агаром XLD M031/M031I или бисмут-сульфитным агаром M027; окончательное подтверждение выполняют по биохимическим и серологическим признакам.

Совместимые среды и компоненты методики

• Буферная пептонная вода двойной концентрации: M614/M614S
• Модифицированная среда Раппапорта—Вассилиадиса с малахитовым зелёным и хлоридом магния: M1658I
• Селенит-цистиновая среда: M025
• Агар XLD: M031/M031I
• Бисмут-сульфитный агар: M027
• Питательный агар: M561A

Комплект поставки

• Лактозный агар с бриллиантовым зелёным и феноловым красным HiMedia M1693-500G — упаковка 500 г.