Лактозный агар с бриллиантовым зеленым и феноловым красным HiMedia M1693-500G (уп/500 гр)

Селективная питательная среда лактозный агар с бриллиантовым зеленым и феноловым красным HiMedia M1693-500G для изоляции видов Salmonella из проб воды. Используется после этапов жидкого обогащения; состав разработан в соответствии с требованиями ISO 6340:1995 и IS 15187:2002.

Принцип измерения и интерпретация

Среда предназначена для селективного выделения видов Salmonella из водных образцов. Для повышения вероятности обнаружения микроорганизмов рекомендуется использовать как минимум две различные среды после селективного обогащения, например, лактозный агар с бриллиантовым зеленым и феноловым красным (M1693), XLD-агар (M031/M031I) или висмут-сульфитный агар (M027).

Появление типичных колоний на селективных средах не является достаточным доказательством наличия Salmonella. Для подтверждения необходимо провести пересев предполагаемых колоний на различные среды для биохимического и серологического анализа.

Характеристики типичных колоний:

• На лактозном агаре с бриллиантовым зеленым и феноловым красным (M1693): красные или слегка розово-белые, непрозрачные, с красным ореолом.
• На XLD-агаре: бесцветные (но выглядят красными), обычно с черным центром.
• На висмут-сульфитном агаре: черные колонии, обычно окруженные металлическим блеском.

Методика проведения анализа

Пробоподготовка

Пробы воды должны быть проанализированы в течение 24 часов после сбора.

1. Для проб объемом более 10 мл: добавить пробу в равный объем буферной пептонной воды (M614/M614S) двойной концентрации или профильтровать через стерильный мембранный фильтр и поместить в 50 мл буферной пептонной воды одинарной концентрации. При необходимости использовать вспомогательные средства фильтрации.
2. Для проб объемом 10 мл и менее: использовать минимум 50 мл буферной пептонной воды одинарной концентрации или объем, минимум в 10 раз превышающий объем пробы.
3. Инкубировать при 36 ± 2 °C в течение 16–20 часов.

Селективное обогащение

Перенести 0,1 мл культуры предварительного обогащения в 10 мл (или 1 мл в 100 мл) среды с малахитовым зеленым и хлоридом магния (модифицированная среда Раппапорта-Вассилиадиса M1658I). Инкубировать на водяной бане при 42 ± 0,5 °C в течение 18–24 часов. В некоторых случаях рекомендуется дополнительно использовать селенит-цистиновую среду (M025).

Посев и инкубация

1. Нанести петлей порцию обогащенной среды на лактозный агар с бриллиантовым зеленым и феноловым красным (M1693) и XLD-агар (M031/M031I).
2. Инкубировать при 36 ± 2 °C в течение 24 часов (для висмут-сульфитного агара — до 48 часов).

Подтверждение

1. Выбрать все (или минимум пять) отчетливые типичные колонии Salmonella с каждой положительной среды.
2. Высеять выбранные колонии на поверхность предварительно высушенных чашек с питательным агаром (M561A) так, чтобы развились изолированные колонии.
3. Инкубировать при 36 ± 2 °C в течение 18–24 часов.
4. Использовать только одиночные изолированные колонии для изучения основных биохимических реакций:
   • Ферментация лактозы: отрицательная.
   • Ферментация глюкозы: положительная.
   • Продукция сероводорода (H₂S): положительная.
   • Реакция на мочевину: отрицательная.
   • Декарбоксилаза лизина: положительная.

Приготовление среды

1. Растворить 46,69 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагревать при периодическом перемешивании до кипения для полного растворения компонентов.
3. ВНИМАНИЕ: НЕ АВТОКЛАВИРОВАТЬ.
4. Охладить до 50 °C.
5. Тщательно перемешать и разлить по стерильным чашкам Петри.

Технические характеристики

Состав, г/л:

• Конечный pH (при 25 °C): 7,0 ± 0,1
• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от светло-желтого до светло-розового цвета
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5 % агаром
• Цвет и прозрачность готовой среды: зеленовато-коричневый, прозрачный или слегка опалесцирующий гель
• pH водного раствора (4,66 % м/об при 25 °C): 6,90–7,10

Дополнительные параметры:

Контроль качества (Культуральные характеристики)

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранить порошок в плотно закрытом контейнере при температуре ниже 30 °C.
• Готовую среду хранить при температуре 2–8 °C.
• Использовать до истечения срока годности, указанного на этикетке.

Область применения

Применяется в микробиологических и санитарно-бактериологических лабораториях для контроля качества воды и выявления патогенных микроорганизмов рода Salmonella. Соответствует сертификату ФСЗ 2009/03709.