Агар для изучения следовых количеств антимикробных компонентов, рН (8.0) HiMedia M1632-500G (уп/500 гр)

Питательная агаровая среда «Агар для изучения следовых количеств антимикробных компонентов, рН (8.0) HiMedia M1632-500G (уп/500 гр)» производства HiMedia предназначена для анализа остаточных антимикробных компонентов при конечном значении pH 8,0. Среда применяется для исследования образцов мяса и органов методом диффузии в агаре и методом четырёх чашек EEC; тест-организмы — Bacillus subtilis и Micrococcus luteus.

Назначение и область применения

Среда Antimicrobial Inhibitor Test Agar pH 8.0 предназначена для анализа остаточных количеств антимикробных компонентов в образцах мяса и органов с использованием Bacillus subtilis ATCC 6633 и Micrococcus luteus ATCC 9341 в качестве тест-организмов.

Среда применяется для оценки остаточных антимикробных компонентов, используемых при санитарной обработке мясных продуктов. Помимо промывки, для санитарной обработки мышечной ткани применяют такие соединения, как хлор и органические кислоты; для этих компонентов могут анализироваться различные концентрации и степень эффективности.

Состав

Расчётный состав на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих параметров.

Конечное значение pH: 8,0 при 25 °C.

Принцип действия и интерпретация результатов

Триптон и мясной экстракт служат источниками углерода, азота и факторов роста, необходимых для развития тест-организмов. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс питательной среды, а фосфатная соль обеспечивает её буферную ёмкость.

Метод диффузии в агаре

Небольшие срезы образца мяса помещают на чашки с засеянной тестовой агаровой средой и инкубируют. Если в образце присутствуют антимикробные компоненты, они диффундируют в среду и подавляют рост тест-организмов, формируя свободную от роста зону ингибирования.

Исследование повторяют на всех трёх вариантах Antimicrobial Inhibitor Test Agar с различными значениями pH:

• M1631 — pH 6,0;
• M1601 — pH 7,2;
• M1632 — pH 8,0.

Различные антибиотики имеют разные диапазоны pH оптимальной активности:

• пенициллин G оптимально активен при pH 6,0;
• стрептомицин — при pH 8,0;
• сульфонамид — при pH 7,2.

Метод четырёх чашек EEC

1. Расплавленную и охлаждённую Antimicrobial Inhibitor Test Agar засевают тест-организмами: суспензией спор Bacillus subtilis (1) и Micrococcus luteus.
2. Посевной материал тщательно перемешивают со средой.
3. Среду разливают в чашки Петри.
4. На одной половине засеянной чашки асептически размещают два небольших фрагмента образца мяса или органа размером 2–8 мм на надлежащем расстоянии друг от друга.
5. На второй половине чашки размещают диски со стандартным антибиотиком, подлежащим анализу, в качестве контроля.
6. В качестве стандарта используют диск со стрептомицином 10 мкг.
7. Чашки с Bacillus subtilis инкубируют 18–24 ч при 30 °C, а чашки с Micrococcus luteus — 18–24 ч при 37 °C.
8. После инкубации измеряют зоны ингибирования.
9. Измеряют расстояние между краем фрагмента ткани и границей роста тест-организма.
10. Зону ингибирования не менее 2 мм считают положительным результатом.
11. Зону менее 2 мм (12 мм) считают сомнительным результатом.
12. Стандартный диск должен демонстрировать минимальную зону ингибирования 6 мм.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 26,07 г сухой питательной среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Добавьте 1 мл суспензии спор Bacillus subtilis или Micrococcus luteus концентрацией 10⁴ КОЕ/мл на каждый литр стерильной охлаждённой среды. Для внесения посевного материала среда должна иметь температуру 50–56 °C.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Контроль качества

Внешний вид и физические свойства

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,3%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель, формирующийся в чашках Петри.
• Реакция: реакция водного раствора концентрацией 2,61 % масс./об. при 25 °C.
• pH: 8,00.

Культуральные характеристики и зоны ингибирования

Культуральную реакцию и зоны ингибирования оценивают после инкубации в течение 18–24 ч: при 30 °C для Bacillus subtilis и при 37 °C для Micrococcus luteus.

Технические характеристики

Условия хранения и срок годности

• Сухую среду хранить при температуре ниже 30 °C в плотно закрытой ёмкости.
• Приготовленную среду хранить при температуре 2–8 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.