Основа среды Левенштейна – Йенсена HiMedia M162-500G (уп/500 гр)

Диагностическая основа среды Левенштейна – Йенсена HiMedia M162-500G (уп/500 г) производства HiMedia для выделения и культивирования видов Mycobacterium. Среда используется для изоляции микобактерий и определения их чувствительности к антимикробным средствам; сертификат ФСЗ 2009/03709.

Принцип измерения и интерпретация

Среды для изоляции микобактерий бывают на основе агара или яиц. Среда Левенштейна – Йенсена (L.J. Medium) является наиболее распространенной яичной средой; она содержит цельные яйца или яичный желток, картофельную муку, соли и глицерин, а затвердевание происходит путем инсписсации (сгущения при нагревании).

В состав входят красители малахитовый зеленый и конго красный (в модификации Йенсена конго красный удален, а концентрация малахитового зеленого увеличена). Малахитовый зеленый служит ингибитором роста посторонней микрофлоры и pH-индикатором:

• Образование синей зоны указывает на снижение pH из-за роста грамположительных контаминантов (например, Streptococci).
• Желтые зоны свидетельствуют о разрушении красителя грамотрицательными бациллами.
• Протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное переваривание среды.

При использовании селективной добавки FD053 (пенициллин и налидиксовая кислота) в сочетании с малахитовым зеленым подавляется рост большинства загрязнений, выживших после деконтаминации образца. РНК в составе добавки FD053 выступает в роли стимулятора, увеличивая скорость изоляции микобактерий.

Методика приготовления и использования

Приготовление среды

1. Суспендируйте 37,24 г порошка в 600 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина. Примечание: не добавляйте глицерин, если планируется культивирование бычьих бактерий или других глицерофобных штаммов.
2. При необходимости нагрейте до полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C и давлении $\approx$0,1 МПа (15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C.
5. Параллельно приготовьте 1000 мл цельной яичной эмульсии, собранной асептически.
6. Асептически добавьте яичную эмульсию к основе среды и, при необходимости, добавьте селективную добавку Графта |FD053|; осторожно перемешайте до получения однородной смеси.
7. Разлейте в стерильные пробирки с завинчивающимися крышками.
8. Установите пробирки под наклоном.
9. Проведите коагуляцию и инсписсацию среды в водяной бане-инсписсаторе или в автоклаве при 85 °C в течение 45 минут.

Посев и инкубация

Рекомендуется проводить посев каждого образца в трех повторностях:

1. Для идентификации сапрофитов при комнатной температуре (25 °C).
2. Для определения наличия или отсутствия пигментации фотохромогенами и скотохромогенами при 35 °C (поочередно на свету и в темноте, в зависимости от типа организма).

Рутинное культивирование проводится в аэробных условиях при 35 °C.

Область применения и ограничения

Тип образца: клинические образцы (мокрота).

Ограничения:

• Среда общего назначения и может не поддерживать рост требовательных (fastidious) организмов.
• Допустим рост некоторых грамположительных контаминантов (например, Streptococci) и грамотрицательных бацилл.
• Возможен рост некоторых сапрофитов.
• Протеолитические контаминанты могут вызвать локальное или полное переваривание среды.

Технические характеристики

Состав (на 600 мл)

Общие параметры

• Внешний вид: гомогенный свободно текущий порошок от зеленовато-синего до синего цвета «павлиний глаз».
• Цвет и прозрачность готовой среды: после инсписсации смесь основы и яичной эмульсии коагулирует в бледные голубовато-зеленые, непрозрачные гладкие скосы.

Культуральные характеристики

Наблюдаются при наличии 5–10 % $\text{CO}_2$ с добавлением яичной эмульсии после инкубации при 35–37 °C в течение 2–4 недель.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре +10…+30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: при температуре +2…+8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать для предотвращения образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Комплект поставки и совместимость

По заявке поставляется:

• FD053 Gruft Micobacterial Supplement / Селективная добавка Графта для микобактерий