Основа среды Левенштейна – Йенсена HiMedia M162-500G (уп/500 гр)

Основа питательной среды Основа среды Левенштейна – Йенсена HiMedia M162-500G (уп/500 гр) — диагностическая сухая среда для выделения и культивирования микобактерий. Основа применяется с эмульсией цельного яйца, а добавление глицерина не рекомендуется при культивировании бычьих и других глицерофобных микроорганизмов.

Назначение

Назначение изделия: основа диагностической питательной среды.

Основа среды Левенштейна – Йенсена предназначена для выделения и культивирования видов Mycobacterium. После добавления эмульсии желтка среда также используется для определения чувствительности микобактерий к антимикробным средствам и может применяться для тестирования на ниацин.

Тип питательной среды: диагностический
Форма выпуска: порошок
Масса упаковки: 500 г
Производитель: HiMedia
Регистрационные данные: ФСЗ 2009/03709

Состав

Формула рассчитана и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 37,24 г порошка в 600 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина. Для бычьих бактерий и других глицерофобных микроорганизмов добавление глицерина не рекомендуется.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте среду автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм, что соответствует приблизительно 0,10 МПа, при температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Одновременно асептически приготовьте 1000 мл эмульсии цельного яйца.
6. Асептически добавьте к основе среды эмульсию яйца и при необходимости селективную добавку Графта для микобактерий FD053.
7. Осторожно перемешайте компоненты до получения однородной смеси.
8. Разлейте смесь в стерильные пробирки с завинчивающимися крышками.
9. Разместите пробирки в наклонном положении.
10. Коагулируйте и уплотните среду в водяной бане для уплотнения среды либо в автоклаве при температуре 85 °C в течение 45 мин.

Принцип действия и интерпретация

Твёрдые среды для выделения и культивирования микобактерий подразделяются на яичные и агаровые. Яичные среды содержат цельные яйца или яичный желток, картофельную муку, соли и глицерин; затвердевание среды происходит за счёт уплотнения при нагревании.

Среда Левенштейна – Йенсена является наиболее распространённой из яичных сред. Первоначальная формула Левенштейна содержала красный конго и малахитовый зелёный. Йенсен модифицировал среду Левенштейна, изменив содержание цитрата и фосфата, исключив красный конго и увеличив концентрацию малахитового зелёного. Груфт дополнительно модифицировал среду Левенштейна – Йенсена, добавив два антимикробных компонента для повышения селективности.

Среда поддерживает рост широкого спектра микобактерий. Пенициллин и налидиксовая кислота, содержащиеся в селективной добавке Графта FD053, совместно с малахитовым зелёным подавляют рост большинства контаминантов, сохранившихся после деконтаминации образца, и одновременно обеспечивают рост микобактерий на ранних сроках. РНК из состава FD053 действует как стимулятор и способствует повышению частоты выделения микобактерий.

Глицерин не следует добавлять в среду при культивировании бычьих или других глицерофобных штаммов.

Малахитовый зелёный выполняет функции ингибитора и индикатора pH:

• образование синей зоны указывает на снижение pH под действием грамположительных контаминантов, например стрептококков;
• появление жёлтых зон связано с разрушением красителя грамотрицательными бациллами;
• протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное переваривание среды.

По рекомендации Hardy и соавторов каждый образец следует высевать и инкубировать в трёх пробирках:

1. Для выявления сапрофитов — при комнатной температуре 25 °C.
2. Для определения наличия или отсутствия пигментации у фотоchromогенных и скотохромогенных микобактерий — при 35 °C с чередованием освещения и темноты в соответствии с типом микроорганизма.

Рутинное культивирование проводят аэробно при 35 °C.

Исследуемый материал

Тип образца: клинический материал.
Образец: мокрота.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов следует использовать соответствующие утверждённые методики деконтаминации и выделения микобактерий.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Среда является средой общего назначения и может не поддерживать рост требовательных микроорганизмов.
2. На среде могут расти некоторые грамположительные контаминанты, например стрептококки, и грамотрицательные бациллы.
3. На среде могут расти некоторые сапрофиты.
4. Протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное переваривание среды.
5. При культивировании бычьих и других глицерофобных штаммов добавление глицерина не допускается или не рекомендуется.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид порошка: однородный сыпучий порошок от зеленовато-синего до павлинье-синего цвета, без комков.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Стерильная базовая среда в смеси с эмульсией цельного яйца после уплотнения коагулирует с образованием непрозрачных гладких скосов бледного голубовато-зелёного цвета.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в присутствии 5–10 % CO₂ с добавлением эмульсии основы цельного яйца после инкубации при 35–37 °C в течение 2–4 недель.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Ёмкость: плотно закрытый контейнер.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом состоянии для предотвращения комкования из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования контейнер следует плотно закрывать.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение указанного срока годности.

Меры безопасности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Руководства по безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

Утилизацию инфекционных материалов выполняют в соответствии с установленными лабораторными процедурами. Материалы, контактировавшие с клиническим образцом, необходимо обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Технические характеристики

| Параметр | Значение | | --- |