HiMedia M162-100G Основа среды Лёвенштейна-Йенсена (L.J.)

Основа питательной среды HiMedia M162-100G Основа среды Лёвенштейна-Йенсена (L.J.) — порошковый препарат массой 100 г. Используется для выделения и культивирования видов Mycobacterium; для приготовления среды требуется эмульсия цельного яйца, а глицерин не добавляют при культивировании бычьих и других глицерофобных бактерий.

Назначение

Основа среды Лёвенштейна—Йенсена предназначена для выделения и культивирования видов Mycobacterium. Тип образца — клинический материал, в частности мокрота.

Состав

Формула рассчитана и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Методика приготовления

1. Взвесьте 37,24 г порошка и суспендируйте в 600 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина. Для бычьих бактерий и других глицерофобных организмов добавление глицерина нежелательно.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа; ≈1,03 бар) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите основу до 45–50 °C.
5. Одновременно асептически приготовьте 1000 мл эмульсии цельного яйца.
6. Асептически добавьте к основе эмульсию яйца и селективную добавку Gruft (FD053), если требуется селективная среда.
7. Осторожно перемешайте компоненты до получения однородной смеси.
8. Разлейте среду в стерильные пробирки с завинчивающимися крышками.
9. Разместите пробирки в наклонном положении.
10. Коагулируйте и уплотните среду в водяной бане для уплотнения среды либо в автоклаве при 85 °C в течение 45 мин.

Принцип действия и интерпретация

Твёрдые среды для выделения и культивирования микобактерий бывают яичными или агаризованными. Яичные среды содержат цельные яйца или яичный желток, картофельную муку, соли и глицерин; затвердевание происходит за счёт уплотнения среды.

Среда Лёвенштейна—Йенсена относится к наиболее широко применяемым яичным средам. Первоначальная формула Лёвенштейна содержала красный конго и малахитовый зелёный. Йенсен модифицировал среду Лёвенштейна: изменил содержание цитрата и фосфата, исключил красный конго и увеличил концентрацию малахитового зелёного. Груфт дополнительно модифицировал среду Лёвенштейна—Йенсена, добавив два антимикробных компонента для повышения селективности.

Среда поддерживает рост широкого спектра микобактерий и может использоваться для тестирования на ниацин.

Пенициллин и налидиксовая кислота из селективной добавки Gruft (FD053) совместно с малахитовым зелёным подавляют рост большинства контаминантов, сохраняющихся после деконтаминации образца, одновременно обеспечивая возможность наиболее раннего роста микобактерий. РНК из добавки FD053 действует как стимулятор и способствует повышению частоты выделения микобактерий.

Малахитовый зелёный выполняет функции ингибитора и индикатора pH:

• образование синей зоны указывает на снижение pH под действием грамположительных контаминантов, например стрептококков;
• появление жёлтых зон связано с разрушением красителя грамотрицательными палочками;
• протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное разжижение и разрушение среды.

Для выявления сапрофитов при комнатной температуре и определения наличия или отсутствия пигментации у фотоchromогенных и скотохромогенных микобактерий рекомендуется инокулировать каждый образец и инкубировать его в трёх экземплярах:

1. Для выявления сапрофитов — при комнатной температуре 25 °C.
2. Для определения пигментации фотоchromогенных и скотохромогенных микобактерий — при 35 °C, попеременно на свету и в темноте в зависимости от типа организма.

Обычное культивирование проводят аэробно при 35 °C.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для клинических образцов следует использовать соответствующие стандартные процедуры деконтаминации и выделения микобактерий.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Среда является средой общего назначения и может не поддерживать рост требовательных микроорганизмов.
2. На среде могут расти некоторые грамположительные контаминанты, например стрептококки, и грамотрицательные палочки.
3. На среде могут расти некоторые сапрофиты.
4. Протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное разрушение среды.
5. Глицерин не следует добавлять, если планируется культивирование бычьих или других глицерофобных штаммов.

Условия культивирования и контрольные характеристики

Рабочие характеристики среды ожидаются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Внешний вид сухого препарата

Зеленовато-синий или павлино-синий однородный сыпучий порошок без комков.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

После уплотнения смеси стерильной основы и эмульсии цельного яйца образуются гладкие непрозрачные скошенные поверхности бледного голубовато-зелёного цвета.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют в присутствии 5–10 % CO₂, с добавлением основы эмульсии яйца, после инкубации при 35–37 °C в течение 2–4 недель.

Хранение и срок годности

• Хранение сухого продукта: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде, чтобы предотвратить образование комков вследствие гигроскопичности.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Место хранения: сухая вентилируемая зона, защищённая от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования контейнер следует герметично закрывать.
• Рабочие характеристики