HiMedia M162-100G Основа среды Лёвенштейна-Йенсена (L.J.)

Основа сухой питательной среды Лёвенштейна-Йенсена (L.J.) HiMedia M162-100G предназначена для изоляции и культивирования видов Mycobacterium. Среда используется для микробиологического анализа клинических образцов (мокроты); вес упаковки составляет 100 г.

Принцип измерения и интерпретация

Среды для изоляции и культивирования микобактерий бывают на основе агара или яиц. Среда Лёвенштейна-Йенсена (L.J.) относится к яичным средам: она содержит цельные яйца или яичный желток, картофельную муку, соли и глицерин, а затвердевание происходит путем инсписсации (сгущения при нагревании).

В состав среды входят красители малахитовый зеленый и конго красный (в оригинальной формуле), которые подавляют рост большинства контаминантов, выживших после деконтаминации образца, стимулируя при этом максимально ранний рост микобактерий. Малахитовый зеленый также служит индикатором pH:

• Образование синей зоны указывает на снижение pH из-за роста грамположительных контаминантов (например, стрептококков).
• Желтые зоны свидетельствуют о разрушении красителя грамотрицательными бациллами.
• Протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное переваривание среды.

Среда поддерживает рост широкого спектра микобактерий и может применяться для проведения ниацинового теста.

Методика приготовления и использования

Приготовление основы

1. Суспендируйте 37,24 г порошка в 600 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина. Примечание: не добавляйте глицерин, если планируется культивирование бычьих бактерий или других глицерофобных организмов.
2. При необходимости нагрейте смесь до полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладите среду до 45–50 °C.

Приготовление конечной среды

1. Подготовьте 1000 мл стерильной эмульсии цельного яйца, собранной асептически.
2. Асептически добавьте эмульсию яйца к охлажденной основе. При необходимости добавьте селективную добавку Груфта (Gruft Selective Supplement, FD053).
3. Осторожно перемешайте до получения однородной смеси.
4. Разлейте среду в стерильные пробирки с завинчивающимися крышками.
5. Установите пробирки под наклоном (для создания скоса).
6. Проведите коагуляцию и инсписсацию среды в водяной бане-инсписсаторе или в автоклаве при 85 °C в течение 45 минут.

Посев и инкубация

Рекомендуется инокулировать каждый образец в трех повторностях:

1. Для идентификации сапрофитов при комнатной температуре (25 °C).
2. Для определения наличия или отсутствия пигментации фотохромогенами и скотохромогенами при 35 °C (поочередно на свету и в темноте, в зависимости от типа организма).

Рутинное культивирование проводится в аэробных условиях при 35 °C.

Технические характеристики

Состав (на 600 мл)

Общие параметры

Контроль качества

Внешний вид

• Порошок: однородный свободнотекущий порошок от зеленовато-синего до синего цвета (цвет «павлиний синий»).
• Готовая среда: после инкубации и инсписсации представляет собой опалесцирующие, гладкие скосы бледно-голубого зеленого цвета.

Культуральные характеристики

Наблюдаются при наличии 5–10 % $\text{CO}_2$, с добавлением яичной эмульсии, после инкубации при 35–37 °C в течение 2–4 недель.

Ограничения применения

1. Среда общего назначения и может не поддерживать рост привередливых (fastidious) организмов.
2. Возможен рост некоторых грамположительных контаминантов (например, стрептококков) и грамотрицательных бацилл.
3. Возможен рост некоторых сапрофитов.
4. Протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное переваривание среды.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре +10…+30 °C. Из-за гигроскопичности продукта после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать во избежание образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания.
• Хранение готовой среды: при температуре +2…+8 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.

Меры предосторожности и утилизация

• Только для диагностики in vitro. Только для профессионального использования.
• При работе использовать защитные перчатки, спецодежду и средства защиты глаз/лица. Соблюдать правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• Загрязненные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве перед утилизацией. Утилизация осуществляется путем автоклавирования и/или сжигания в соответствии с лабораторными протоколами по обращению с инфекционными материалами.