Дифференциальный усиленный агар для выделения клостридий HiMedia M1603-500G (уп/500 гр)

Дифференциальный усиленный агар для выделения клостридий HiMedia M1603-500G (производство HiMedia) предназначен для количественного учёта и культивирования клостридий из проб воды и клинического материала. Среда позволяет дифференцировать сульфитредуцирующие микроорганизмы по образованию чёрных колоний.

Область применения

Среда рекомендуется для выделения и подсчёта Clostridia из проб воды и клинических образцов (в частности, фекалий человека и животных). Также применяется для:

• исследования кишечной флоры (при добавлении крови);
• общего подсчёта бактерий и Lactobacillus в фекалиях;
• определения Bacteroides;
• подсчёта Clostridium thermosaccharolyticum в сахарных растворах (в сочетании с мембранным фильтром).

Принцип измерения и интерпретация

Питательная основа состоит из триптона, пептона, HM-пептона B и дрожжевого экстракта, которые обеспечивают организм азотом, незаменимыми питательными веществами и факторами роста. Глюкоза служит источником углерода и энергии.

Система индикации основана на взаимодействии бисульфита натрия и цитрата аммония-железа (III), что приводит к образованию чёрного осадка при восстановлении сульфита. Резазурин выступает в роли окислительно-восстановительного индикатора, позволяющего контролировать анаэробные условия в среде.

Интерпретация результатов

• Почернение среды в пробирках без термического шока является предварительным свидетельством наличия сульфитредуцирующих клостридий (требуется пересев на агар для подтверждения).
• Почернение среды в пробирках, подвергнутых термическому шоку, подтверждает наличие клостридий.

Методика проведения анализа

Подготовка образцов

Материал измельчают в гомогенизаторе (stomacher) и готовят серию десятикратных разведений в растворе Рингера (1/4 концентрации, M525) или в 0,1 % пептонной воде (M028).

Процедура посева

1. Переносят 1 мл или 0,1 мл соответствующего разведения в дно пробирки с расплавленным агаром (45–50 °C).
2. Готовят дубликаты пробирок.
3. Одну из пробирок (дубликат) нагревают при температуре 80 ± 1 °C в течение 10 минут для уничтожения вегетативных клеток.
4. Обе пробирки (с термическим шоком и без него) инкубируют при температуре 35 ± 1 °C в течение 5 суток.
5. Оценивают почернение среды.

Альтернативные методы посева

• Поверхностный посев на чашки Петри (методом штриха, посевом распределением или методом полива).
• Посев в глубокий агар методом укола.
• Использование среды в качестве накладки на мембранный фильтр.
• Инкубация чашек и пробирок при 35 ± 2 °C в течение 24–48 часов в строго анаэробных условиях.

Приготовление и стерилизация

1. Растворить 42,5 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C, тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 7,1 ± 0,2.

Дополнительные параметры

• Сертификат: ФСЗ 2009/03709.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободнотекущий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-розовый, прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
• Реакция: pH 4,25 % (масса/объём) водного раствора при 25 °C составляет 7,1 ± 0,2.
• Диапазон pH: 6,90–7,30.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются в анаэробной атмосфере после инкубации при 30–35 °C в течение 1 недели.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре +10…+30 °C в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания.
• Хранение готовой среды: при температуре +20…+30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; неправильное хранение может привести к образованию комков.

Ограничения и меры предосторожности

• Среда предназначена для диагностики in vitro и профессионального использования.
• Для полной идентификации микроорганизмов требуются дополнительные биохимические и серологические тесты.
• При работе с клиническими образцами необходимо соблюдать стандартные меры предосторожности и использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица).
• Загрязненные материалы перед утилизацией подлежат обязательному автоклавированию или сжиганию.