Агар для изучения следовых количеств антимикробных компонентов, рН ( 7.2) HiMedia M1601-500G (уп/500 гр)

Питательная агаризованная среда Агар для изучения следовых количеств антимикробных компонентов, рН ( 7.2) HiMedia M1601-500G (уп/500 гр) с конечным значением pH 7,2. Среда предназначена для анализа остаточных количеств антимикробных компонентов в образцах мяса и органов методом диффузии в агар и с использованием Bacillus subtilis ATCC 6633 в качестве тест-организма.

Назначение

Antimicrobial Inhibitor Test Agar pH 7.2 рекомендован для анализа остаточных количеств антимикробных компонентов в образцах мяса и органов. В качестве тест-организма используют Bacillus subtilis ATCC 6633.

Среда применяется для выявления остатков антимикробных соединений, используемых при санитарной обработке мясного сырья, включая хлор и органические кислоты. Эффективность различных концентраций таких соединений может оцениваться по зонам ингибирования роста тест-организма.

Состав

Расход обезвоженной среды — 25,34 г на 1000 мл воды.

Конечный pH: 7,2 при 25 °C.

Формула скорректирована и стандартизирована с учётом параметров рабочих характеристик среды.

Принцип измерения и интерпретация результатов

Пептон служит источником углерода, азота и факторов роста для микроорганизмов. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс среды. Фосфатная соль обеспечивает буферную ёмкость.

При наличии в образце антимикробных компонентов они диффундируют в агар и подавляют рост тест-организма. Результат оценивают по зоне, свободной от роста, вокруг образца или стандартного диска с антибиотиком.

Для разных антибиотиков оптимальная активность достигается при различном pH:

• пенициллин G оптимально активен при pH 6,0;
• стрептомицин оптимально активен при pH 8,0;
• сульфонамиды оптимально активны при pH 7,2.

Для повышения чувствительности среды при определении остаточных сульфонамидов в образцах мяса и органов в состав анализа добавляют триметоприм в количестве 50 мкг/л среды.

Для комплексного анализа тест повторяют на трёх вариантах агара для определения антимикробных ингибиторов с разными значениями pH:

• M1631 — pH 6,0;
• M1601 — pH 7,2;
• M1632 — pH 8,0.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 25,34 г обезвоженной среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунтов (ориентировочно ≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Добавьте 1 мл суспензии спор Bacillus subtilis на каждый литр стерильной охлаждённой среды.
6. Добавьте 50 мкг триметоприма на каждый литр среды.
7. Тщательно перемешайте.
8. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Методика диффузии в агар

1. Подготовьте чашки Петри с агаром, засеянным тест-организмом.
2. Разместите небольшие срезы образца мяса на поверхности тест-агара.
3. Инкубируйте чашки.
4. При наличии в образце антимикробных компонентов вещества диффундируют в среду и подавляют рост Bacillus subtilis, формируя зону ингибирования.
5. Измерьте зону ингибирования вокруг образца.

В рамках анализа используют варианты среды M1631, M1601 и M1632 с pH 6,0, 7,2 и 8,0 соответственно.

Метод четырёх чашек ЕЭС

1. Расплавьте среду для определения антимикробных ингибиторов и охладите её до 45–50 °C.
2. Внесите суспензию спор тест-организма Bacillus subtilis и тщательно перемешайте.
3. Разлейте засеянную среду в чашки Петри.
4. На одну половину каждой засеянной чашки асептически поместите небольшой фрагмент образца мяса или органа размером 2–8 мм, расположив его на заданном расстоянии.
5. На вторую половину чашки поместите стандартный диск с антибиотиком, соответствующим анализируемому соединению, для использования в качестве контроля.
6. В качестве стандартного диска для сульфонамидов используйте диск с 0,5 мкг сульфонамида.
7. Инкубируйте чашки при 30 °C в течение 18–24 ч для Bacillus subtilis.
8. После инкубации измерьте зону ингибирования.
9. Измерьте расстояние между краем тканевого фрагмента и границей роста тест-организма.

Интерпретация зоны ингибирования:

• зона не менее 2 мм — положительный результат;
• зона менее 2 мм — сомнительный результат;
• стандартный диск должен формировать зону ингибирования не менее 6 мм.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,3%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель в чашках Петри.
• Реакция: реакция 2,53%-ного водного раствора при 25 °C.
• pH: 7,20.

Культуральные характеристики

Культуральную реакцию и зоны ингибирования наблюдали для Bacillus subtilis после инкубации при 30 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

• Наименование: Antimicrobial Inhibitor Test Agar pH 7.2.
• Артикул: M1601-500G.
• Назначение изделия: агар.
• Масса упаковки: 500 г.
• Конечный pH: 7,2 при 25 °C.
• Раствор для определения реакции: 2,53 % мас./об. при 25 °C.
• Тест-организм: Bacillus subtilis ATCC 6633.

Условия хранения и срок годности

• Условия хранения сухой среды: температура ниже 30 °C.
• Упаковка при хранении: плотно закрытый контейнер.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Сравнительный контекст

Для анализа остаточных антимикробных компонентов применяют три варианта агара с разными значениями pH: M1631 — 6,0, M1601 — 7,2 и M1632 —