Основа бульона Болтона HiMedia M1592-500G (уп/500 гр)

Основа питательной среды Основа бульона Болтона HiMedia M1592-500G (уп/500 гр) для селективного обогащения видов Campylobacter из пищевых продуктов, кормов для животных и термотолерантных Campylobacter из воды. Основа применяется для обнаружения и последующего подтверждения Campylobacter при начальной навеске 10 г или 10 мл в 90 мл среды с инкубацией в микроаэробной атмосфере при 37 °C и 41,5 °C.

Назначение и область применения

Основа бульона Болтона предназначена для селективного обогащения видов Campylobacter из пищевых продуктов, кормов для животных и термотолерантных видов Campylobacter из образцов воды.

Среда используется для обнаружения и подсчёта видов Campylobacter в пищевых и экологических образцах, включая контроль в зоне производства пищевых продуктов, а также для анализа воды. Состав и критерии эффективности соответствуют требованиям ISO 10272-1:2017, ISO 17995:2019(E) и ISO 11133:2014 (E) с изменением Amd.: 2020.

Сертификат: ФСЗ 2009/03706
Назначение изделия: основа питательной среды
Происхождение: животное

Состав

Основа бульона Болтона M1592

Содержание компонентов приведено в расчёте на 1 л среды.

Селективная добавка Болтона FD231

В комплект входят 2 флакона селективной добавки Болтона FD231.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Основа эквивалентна ферментативному перевариванию тканей животных.

Конечный pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация

Виды Campylobacter вызывают диарею от лёгкой до тяжёлой степени; жидкий водянистый стул часто сменяется кровавой диареей. Основными возбудителями инфекций являются C. jejuni, C. coli и C. lari. Первичным источником заражения человека видами Campylobacter служат пищевые продукты животного происхождения. Непастеризованное молоко наиболее часто связывают со вспышками пищевого энтерита, вызванного Campylobacter jejuni.

Изначально Campylobacter относили к роду Vibrio, однако эти микроорганизмы отличаются от Vibrio составом оснований ДНК и способностью расти в условиях пониженного парциального давления кислорода. Селективные среды первоначально разрабатывали для выделения C. jejuni из фекалий с использованием комбинации антибиотиков в богатой базовой среде. Основа бульона Болтона сформулирована по методу Болтона.

Селективность среды обеспечивается добавлением антибиотиков цефоперазона, ванкомицина, триметоприма и амфотерицина B. Антибиотики вводятся в виде лиофилизированных добавок. Пептон, гидролизат лактальбумина и дрожжевой экстракт способствуют восстановлению сублетально повреждённых клеток Campylobacter. Ванкомицин, цефоперазон и триметоприм подавляют рост грамположительных и грамотрицательных бактерий, а амфотерицин B в значительной степени снижает рост дрожжей и плесневых грибов.

Типы образцов

• Пищевые продукты.
• Корма для животных.
• Образцы воды.

Методика подготовки и проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 13,80 г основы в 500 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте среду автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, ориентировочно 0,10 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте регидратированное содержимое 1 флакона селективной добавки Болтона FD231.
6. Добавьте 25 мл стерильной лизированной дефибринированной крови лошади. Лошадиную кровь можно лизировать сапонином либо замораживанием с последующим размораживанием.
7. Тщательно перемешайте среду.
8. В асептических условиях разлейте среду в стерильные пробирки или колбы в необходимом объёме.

Селективное обогащение

1. Для приготовления исходной суспензии внесите 10 г или 10 мл исследуемой пробы в 90 мл обогатительной среды «Бульон Болтона».
2. Инкубируйте исходную суспензию в микроаэробной атмосфере при 37 °C в течение 5 ± 1 ч.
3. Затем продолжите инкубацию при 41,5 °C в течение 44 ± 4 ч.

Высев на плотную среду

Из полученной культуры после обогащения выполните посев стерильной петлёй объёмом 10 мкл на поверхность агара mCCD M887I. Инкубируйте чашки при 41,5 °C в микроаэробной атмосфере в течение 44 ± 4 ч.

Подтверждение

Для подтверждения проводят биохимические и серологические тесты.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид порошка: однородный свободно текучий порошок от светло-жёлтого до коричневато-жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базальная среда: прозрачный или слегка опалесцирующий раствор коричневато-жёлтого цвета.
• После добавления лизированной крови лошади: непрозрачный раствор от красного до коричневого цвета в пробирках.

Реакция среды

Реакция 2,76 % масс./об. водного раствора при 25 °C.

pH: 7,4 ± 0,2
Диапазон pH: 7,20–7,60

Культуральные характеристики

Продуктивность

Культуральные характеристики определяют после добавления селективной добавки Болтона FD231 и инкубации при 37 ± 1 °C в течение 5 ± 1 ч, затем при 41,5 ± 1 °C в течение 44 ± 4 ч в микроаэробной атмосфере. Последующий пересев выполняют на M887I при 41,5 °C в микроаэробной атмосфере в течение 44 ± 4 ч.

Селективность

Культуральные характеристики определяют после добавления селективной добавки Болтона FD231 и инкубации при 37 ± 1 °C в течение 5 ± 1 ч, затем при 41,5 ± 1 °C в течение 44 ± 4 ч в микроаэробной атмосфере. Последующий пересев выполняют на M887I при 41,5 °C в микроаэробной атмосфере в течение 44 ± 4 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ограничения применения

1. Отдельные микроорганизмы различаются по требованиям к условиям роста и могут демонстрировать неодинаковую картину роста на среде.
2. Каждая партия среды протестирована на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). Пользователям рекомендуется проводить собственную валидацию.
3. Для подтверждения проводят биохимические и серологические тесты.

Условия эффективности

Эффективность среды ожидается при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке и в пределах срока годности при хранении при рекомендованной температуре.

Хранение и срок годности

• Температура хранения основы: 10–30 °C.
• Условия хранения основы: в плотно