HiMedia M1591-5KG Триптон-желчный глюкуроновый агар

Питательная микробиологическая среда HiMedia M1591-5KG Триптон-желчный глюкуроновый агар представляет собой сухой порошок для выявления и количественного определения Escherichia coli в пищевых продуктах, кормах, воде и клинических образцах. Среда обеспечивает хромогенное обнаружение активности β-глюкуронидазы с образованием сине-зелёных колоний и применяется без дополнительного подтверждения мембранной фильтрацией или индольным реактивом.

Назначение и область применения

Среда предназначена для выявления и количественного определения Escherichia coli в:

• пищевых продуктах;
• кормах для животных;
• пробах воды;
• клинических образцах, включая мочу.

Методика подходит для работы на мембранных фильтрах и для прямого посева без дополнительного подтверждения индольным реактивом. Состав и рабочие характеристики среды соответствуют требованиям ISO 16649-2:2001 и ISO 11133:2014 (E) / Amd.:2020, применяемым к методам микробиологического анализа пищевых продуктов, кормов и воды.

Состав

Состав среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

• Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2
• Физическая форма: порошок
• Происхождение компонентов: животное
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: ПЭВП (HDPE)
• Масса: 5 кг

Принцип действия и интерпретация

Триптон-желчный агар применяется для выявления Escherichia coli в пищевых продуктах. Большинство штаммов E. coli можно отличить от других колиформных бактерий по наличию фермента глюкуронидазы, характерного для E. coli, однако отдельные штаммы могут не обладать активностью β-глюкуронидазы.

Хромогенный компонент X-глюкуронид, содержащийся в среде, используется для выявления активности глюкуронидазы. Клетки E. coli поглощают X-глюкуронид, после чего внутриклеточный фермент глюкуронидаза расщепляет связь между хромофором и глюкуронидом. Освобождённый хромофор придаёт колониям E. coli сине-зелёную окраску.

Триптон служит источником углерода, азотистых соединений, аминокислот с длинной цепью, витаминов и других необходимых для роста питательных веществ. Смесь желчных солей подавляет рост грамположительных микроорганизмов.

Среду также можно применять для выделения E. coli из клинических образцов.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 39,6 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении около 0,103 МПа (15 фунтов давления) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте.
6. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Подготовка проб и проведение анализа

Перед использованием поверхность разлитой и застывшей среды необходимо высушить.

Для пищевых образцов:

1. Разбавьте пробу в соотношении 1:5 или 1:10 стерильной 0,1%-ной (масс./об.) пептонной водой (M028).
2. Гомогенизируйте образец в блендере или стомахере.
3. Нанесите на поверхность чашки 0,5 или 1,0 мл гомогенизированного пищевого образца.
4. Распределите пробу по поверхности стерильным стеклянным шпателем.
5. Инкубируйте чашки при 30 °C в течение 4 ч.
6. Продолжите инкубацию при 44 °C в течение 18 ч.

Сине-зелёные колонии интерпретируются как колонии, характерные для Escherichia coli, с учётом ограничений специфичности и результатов контроля качества.

Типы образцов и обращение с ними

• Клинические образцы: моча.
• Пищевые образцы.
• Образцы воды.

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом в соответствии с установленными методическими руководствами.

Для пищевых образцов соблюдайте соответствующие методы отбора и подготовки проб согласно применяемым методическим руководствам.

Для образцов воды используйте соответствующие методы отбора и обработки проб в соответствии с методическими руководствами и местными стандартами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера изучите маркировку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила работы в микробиологической лаборатории.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. β-глюкуронидаза присутствует у 97 % штаммов E. coli, однако отдельные штаммы E. coli могут давать отрицательную реакцию.
2. Некоторые виды рода Salmonella являются β-глюкуронидаза-положительными.
3. Разные микроорганизмы имеют индивидуальные требования к росту и могут демонстрировать различные варианты роста на среде.
4. Каждая серия среды проверяется на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). При необходимости выявления микроорганизма, не указанного в COA, рекомендуется валидировать среду с учётом конкретных требований пользователя.

Условия хранения и срок годности

• Хранение сухой среды: при температуре 15–25 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение приготовленной среды: при температуре 2–8 °C.
• Срок использования: до даты истечения срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Храните продукт в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования плотно закрывайте контейнер.
• Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение установленного срока годности.

Контроль качества

Внешний вид и физические свойства

• Внешний вид: однородный, свободно текучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: светло-жёлтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель в чашках Петри.
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 3,96 % (масс./об.) при 25 °C.
• pH: 7,00–7,40.
• pH по спецификации: 7,2 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Продуктивность: культуральные характеристики регистрируют после инкубации при 44 ± 1 °C в течение 21 ± 3 ч. Степень восстановления считают равной 100 % для роста бактерий на референсной среде — соево-казеиновой агаровой среде (триптиказо-соевом агаре).

Специфичность: культуральные характеристики регистрируют после инкубации при 44 ± 1 °C в течение 21 ± 3 ч.

Селективность: культуральные характеристики регистрируют после инкубации при 44 ± 1 °C в течение 21 ± 3 ч.