Триптон-цистиновый агар HiMedia M159-500G (уп/500 гр)

Микробиологическая питательная среда Триптон-цистиновый агар HiMedia M159-500G (уп/500 гр) с конечным pH 7,3±0,2. Триптон-цистиновый агар предназначен для хранения, пересевов, определения подвижности и изучения ферментации микроорганизмов при добавлении углеводов.

Назначение

Рекомендуется для поддержания культур, пересевов, определения подвижности и изучения ферментации с добавлением различных углеводов.

Тип питательной среды: транспортная
Назначение изделия: агар
Сертификат: ФСЗ 2009/03707
Тип образца: изолированный микроорганизм

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Конечный pH при 25 °C: 7,3±0,2

Приготовление питательной среды

1. Суспендируйте 28,51 г среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду в пробирки по 8–10 мл.
4. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. При необходимости добавьте соответствующий углевод в концентрации 0,5–1,0 %.
7. Тщательно перемешайте и оставьте пробирки охлаждаться в вертикальном положении.

Принцип действия и интерпретация результатов

Триптон-цистиновый агар подходит для выращивания и поддержания бактерий, включая прихотливые микроорганизмы, без добавления дополнительных обогащающих компонентов. Формула разработана Vera как простая полужидкая среда для идентификации и поддержания Gonococcus и других бактерий.

При посеве уколом в глубину среды можно длительно поддерживать многие культуры, включая прихотливые микроорганизмы Brucella, Corynebacterium, Pasteurella, Pneumococcus и Streptococcus, без дополнительных обогащений при хранении в подходящих температурных условиях. Некоторые светочувствительные анаэробные микроорганизмы способны расти в этой среде без специальных условий; в восстановленной атмосфере они демонстрируют хороший рост.

Максимальная эффективность среды достигается при использовании сразу после приготовления. При длительном хранении необходимо предотвращать обезвоживание; для этого рекомендуется использовать пробирки с винтовыми крышками или обеспечивать надёжную герметизацию.

Анаэробные микроорганизмы Actinomyces bovis, Bacteroides funduliformis и Leptotrichia хорошо растут в этой среде в присутствии CO₂. После добавления углевода среда может использоваться для изучения ферментации сахаров микроорганизмами, которые не растут на классических средах с феноловым красным.

Подкисление среды определяется по изменению цвета индикатора фенолового красного. В полужидком агаре кислые реакции выявляются легче, поскольку образующаяся кислота не диффундирует сразу по всей культуре, как в жидкой среде. При отсутствии сбраживаемого углевода большинство культур демонстрирует щелочную реакцию.

Подвижность микроорганизмов определяется по характеру распространения роста:

• подвижные культуры растут за пределами линии инокуляции;
• неподвижные микроорганизмы растут в области посева вдоль линии укола, при этом окружающая среда остаётся прозрачной.

Триптон и L-цистин обеспечивают питательные вещества, необходимые для роста прихотливых микроорганизмов. Ферментация углеводов определяется по видимому изменению цвета среды благодаря наличию индикаторного красителя фенолового красного. При метаболизме углевода микроорганизмами образуются органические кислоты, вызывающие подкисление среды.

Пептоны, присутствующие в среде, также расщепляются бактериями с образованием веществ, имеющих щелочную реакцию. Феноловый красный изменяет цвет с красно-оранжевого на жёлтый, когда количество кислоты, образованной при ферментации углевода, превышает количество щелочных конечных продуктов расщепления пептона. Изменение цвета фенолового красного происходит примерно при pH 6,8, близком к исходному pH среды.

Методика инокуляции и инкубации

При изучении ферментации у представителей рода Neisseria инокулируют только поверхность среды в пробирке.

Для факультативных организмов, включая стрептококки, и строго анаэробных организмов выполняют посев инокуляционной иглой уколом в центр среды примерно на половину её глубины.

Инкубируйте пробирки с ослабленными крышками в аэробных или анаэробных условиях в зависимости от исследуемого организма:

• Neisseria следует инкубировать с неплотно закрытыми крышками;
• при использовании инкубатора с CO₂ крышки оставляют неплотно закрытыми;
• в инкубаторе без CO₂ допускается инкубация с плотно закрытыми крышками;
• для ускорения роста и ферментационных реакций анаэробные культуры предпочтительно инкубировать в присутствии CO₂, а также водорода или азота.

Некоторые строгие анаэробы не растут или плохо растут в отсутствие CO₂.

Интерпретация ферментации

• Жёлтый цвет в верхней трети пробирки или по всей толщине среды указывает на образование кислоты в результате ферментации углевода.
• Красный цвет, соответствующий щелочной реакции, или оранжевый цвет, соответствующий нейтральной реакции, указывает, что углевод не расщеплялся и использовались только пептоны.
• Инокулированная среда без углевода также приобретает красный или оранжевый цвет.
• Для работы со средой требуется высокая посевная доза.
• Продолжительная инкубация может привести к изменению pH-индикатора или аномальным реакциям на лактозу и сахарозу у патогенных представителей рода Neisseria.
• Представители рода Neisseria обычно образуют кислоту только в области уколов, преимущественно в верхней трети среды.
• Сильная кислотная реакция с жёлтым окрашиванием по всей толщине среды может указывать на присутствие контаминирующего организма.
• Для подтверждения присутствия представителей рода Neisseria необходимо выполнить окраску по Граму и оксидазный тест роста.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или светло-розовый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Полужидкая среда, сопоставимая с 0,25 %-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде столбиков образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

Реакция среды

Реакция водного раствора с концентрацией 2,85 % по массе к объёму при 25 °C.

pH: 7,3±0,2

Диапазон pH

pH: 7,10–7,50

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 4–18 ч или дольше при необходимости.

* Соответствующие номера WDCM.

Ограничения применения

1. Недостаточная посевная доза может привести к получению ложных результатов.
2. Не выполняйте посев до дна пробирки: неправильная инокуляция может вызвать слабую кислотную реакцию и затруднить интерпретацию результатов.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для образцов изолированных микроорганизмов применяйте соответствующие методы сбора и обработки образцов в соответствии с руководствами и местными стандартами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C.
• Условия хранения: плотно закрытый контейнер, сухое вентилируемое помещение, защита от экстремальных температур и источников воспламенения.
• Срок использования: до даты, указанной на этикетке.
• После вскрытия плотно закрывайте флакон и храните продукт в сухом состоянии.
• Из-за гигроскопичности порошка необходимо предотвращать образование комков.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• После каждого использования контейнер необходимо герметично закрывать.
• Наилучшие характеристики среды сохраняются при использовании в пределах установленного срока годности.

Меры безопасности

Перед вскрытием контейнера ознакомьтесь с этикеткой. При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одеж