Триптон-цистиновый агар HiMedia M159-500G (уп/500 гр)

Полужидкая питательная среда Триптон-цистиновый агар HiMedia M159-500G (уп/500 г) для поддержания, пересева и идентификации прихотливых микроорганизмов. Применяется для определения подвижности бактерий и изучения ферментативных реакций при добавлении углеводов; имеет сертификат ФСЗ 2009/03707.

Принцип измерения и интерпретация

Среда предназначена для культивирования и поддержания бактерий, в том числе прихотливых, без использования дополнительных добавок. Разработка основана на методе Веры как простой полужидкой среды для идентификации и сохранения Gonococcus и других бактерий.

В данной среде методом глубокого посева (прокола) могут длительно храниться культуры Brucella, Corynebacterium, Pasteurella, Pneumococcus и Streptococcus при соблюдении температурного режима. Некоторые светочувствительные анаэробные микроорганизмы способны расти в этой среде без специальных условий, однако в условиях восстановленной атмосферы наблюдается идеальный рост. Анаэробы, такие как Actinomyces bovis, Bacteroides funduliformis и Leptotrichia, хорошо растут в присутствии CO₂.

Определение ферментации и подвижности

При добавлении углеводов среда используется для изучения ферментации сахаров микроорганизмами, которые не растут на классических средах с феноловым красным.

• Индикатор: феноловый красный.
• Кислая реакция: при метаболизме углеводов образуются органические кислоты, и цвет среды меняется с красно-оранжевого на жёлтый. В полужидком агаре закисление обнаруживается легче, так как кислота не диффундирует мгновенно по всему объему, как в бульоне.
• Щелочная реакция: при отсутствии ферментируемых углеводов бактерии расщепляют пептоны, что приводит к защелачиванию среды (красный или оранжевый цвет).
• Подвижность: определяется по характеру роста. Подвижные культуры растут в сторону от линии инокуляции, вызывая помутнение среды. Неподвижные организмы растут строго вдоль линии прокола, окружающая область остается прозрачной.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Суспендируйте 28,51 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Разлейте по пробиркам порциями по 8–10 мл.
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,1 МПа) в течение 15 минут.
5. Охладите до 45–50 °C. При необходимости добавьте соответствующий углевод (в концентрации 0,5–1,0 %).
6. Тщательно перемешайте и дайте среде застыть в вертикальном положении.

Посев и инкубация

• Для изучения ферментации рода Neisseria: инокулируют только поверхность среды в пробирке.
• Для факультативных (например, стрептококков) и строго анаэробных организмов: инокулируют методом прокола иглой на глубину примерно 1/2 среды.
• Условия инкубации:
  • Neisseria: с неплотно закрытыми крышками; при использовании CO₂-инкубатора или в обычных условиях с плотно закрытыми крышками.
  • Анаэробные культуры: предпочтительно в присутствии CO₂ совместно с водородом или азотом для ускорения роста и ферментации.

Интерпретация результатов

• Жёлтый цвет (в верхней трети или по всему объему): положительная реакция, образование кислоты вследствие ферментации углеводов.
• Красный (щелочной) или оранжевый (нейтральный) цвет: углевод не расщеплен, использован только пептон.
• Особенности Neisseria: обычно производят кислоту только в области прокола (верхняя треть). Интенсивное защелачивание/закисление по всему объему может указывать на контаминацию. Для подтверждения необходимо выполнить окрашивание по Грамму и оксидазный тест.

Технические характеристики

Состав, г/л:

• Конечный pH (при 25 °C): 7,3 ± 0,2
• Внешний вид: светло-жёлтый или светло-розовый гомогенный свободнотекучий порошок
• Желирование: полужидкий гель (сопоставимо с 0,25 % агаром)
• Цвет и прозрачность готовой среды: красный, прозрачный или слегка опалесцирующий гель в пробирках (столбик)
• Диапазон pH: 7,10–7,50

Дополнительные параметры:

Контроль качества (Культуральные характеристики)

Характеристики наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 4–18 часов (или дольше при необходимости).

Область применения и ограничения

Тип образца: изолированные микроорганизмы.

Ограничения:

1. Недостаточная посевная доза (инокулят) может привести к ложноотрицательным результатам.
2. Не следует проводить инокуляцию до самого дна пробирки; неправильный посев может привести к слабой кислотной реакции, что затруднит интерпретацию теста.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом месте, вдали от источников возгорания. Из-за гигроскопичности продукта рекомендуется использовать завинчивающиеся крышки или герметичную запайку для предотвращения комкования.
• Хранение готовой среды: при температуре 20–30 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.

Меры предосторожности и утилизация

• Безопасность: использовать защитные перчатки, одежду, средства защиты глаз и лица. Соблюдать стандартные правила микробиологической работы в лаборатории.
• Утилизация: все загрязненные материалы и использованные среды должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией в соответствии с местными стандартами по обращению с инфекционными материалами.