HiMedia M159-100G Цистин-триптоновый агар

Полусинтетическая питательная среда HiMedia M159-100G Цистин-триптоновый агар для поддержания, субкультивирования и идентификации требовательных микроорганизмов. Применяется для изучения подвижности бактерий и ферментации углеводов при добавлении соответствующих сахаров.

Принцип измерения и интерпретация

Цистин-триптоновый агар предназначен для выращивания и поддержания культур бактерий, включая требовательные виды, без использования дополнительных добавок. Среда разработана как простой полужидкий субстрат для идентификации и сохранения Gonococcus и других микроорганизмов. В данной среде методом глубокого посева (прокола) могут длительно храниться культуры Brucella, Corynebacterium, Pasteurella, Pneumococcus и Streptococcus.

В среде могут расти некоторые светочувствительные анаэробные микроорганизмы; при создании условий пониженного содержания кислорода наблюдается идеальный рост. Анаэробы, такие как Actinomyces bovis, Bacteroides funduliformis и Leptotrichia, хорошо растут в присутствии CO₂.

Определение ферментации углеводов

При добавлении углеводов среда используется для изучения сахаролитической активности микроорганизмов, которые не растут на классических средах с феноловым красным.

• Кислая реакция: метаболизм углеводов приводит к образованию органических кислот, что вызывает изменение цвета индикатора фенолового красного с красно-оранжевого на жёлтый. В полужидком агаре acid-реакции обнаруживаются легче, так как кислоты не диффундируют мгновенно по всему объему, в отличие от бульонов.
• Щелочная реакция: при отсутствии ферментируемых углеводов бактерии расщепляют пептоны, что приводит к образованию щелочных продуктов. Среда сохраняет красный или оранжевый цвет.

Определение подвижности

Подвижность определяется по характеру роста в полужидкой среде:

• Подвижные культуры: рост распространяется от линии инокуляции, вызывая помутнение среды.
• Неподвижные организмы: рост ограничен зоной инокуляции вдоль линии прокола, окружающая среда остается прозрачной.

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендировать 28,51 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Разлить по пробиркам по 8–10 мл.
4. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
5. Охладить до 45–50 °C. При необходимости добавить соответствующий углевод (в концентрации 0,5–1,0 %).
6. Тщательно перемешать и оставить остыть в вертикальном положении.

Посев и инкубация

• Для изучения ферментации рода Neisseria: инокулируют только поверхность среды в пробирке.
• Для факультативных (например, Streptococcus) и строгих анаэробов: проводят посев методом прокола инокуляционной иглой на глубину примерно 1/2 объема среды.
• Режимы инкубации:
  • Neisseria: с неплотно закрытыми крышками; при использовании CO₂-инкубатора — с неплотными крышками, в обычном инкубаторе — с плотно закрытыми крышками.
  • Анаэробные культуры: предпочтительно в присутствии CO₂ совместно с водородом или азотом для ускорения роста и ферментации.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 7,3 ± 0,2

Дополнительные параметры

• Внешний вид: светло-жёлтый или светло-розовый гомогенный свободнотекучий порошок.
• Свойства гелеобразования: полужидкий гель, сопоставим с 0,25% агаром.
• Цвет и прозрачность готовой среды: красный цвет, от прозрачного до слегка опалесцирующего геля (в пробирках формирует столбик).
• Диапазон pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 4–18 часов (или дольше при необходимости).

Область применения и ограничения

Тип образца: изолированные микроорганизмы.

Ограничения

1. Недостаточный объем инокулята может привести к ложноотрицательным результатам.
2. Запрещается проводить инокуляцию до самого дна пробирки; неправильный посев может привести к слабой кислотной реакции, что затруднит интерпретацию теста.

Особенности интерпретации

• Жёлтый цвет в верхней трети или по всему объему среды указывает на продукцию кислоты вследствие ферментации углеводов.
• Красный (щелочной) или оранжевый (нейтральный) цвет указывает на то, что углевод не расщеплен и использован только пептон.
• При выявлении сильного закисления (интенсивный жёлтый цвет) по всему объему среды возможно присутствие контаминантов. Для подтверждения наличия видов Neisseria необходимо провести окрашивание по Грамму и оксидазный тест.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере в сухом вентилируемом месте, защищенном от перепадов температур и источников возгорания.
• Хранение готовой среды: при температуре 20–30 °C.
• Особенности: из-за гигроскопичности продукта рекомендуется использовать завинчивающиеся крышки или надежную герметизацию для предотвращения комкования.

Безопасность и утилизация

• Меры предосторожности: использовать защитные перчатки, одежду, средства защиты глаз и лица. Соблюдать стандартные правила микробиологической лабораторной практики.
• Утилизация: загрязненные материалы и использованные среды должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией в соответствии с местными стандартами.