HiMedia M159-100G Цистин-триптоновый агар

Полутвёрдая питательная среда HiMedia M159-100G Цистин-триптоновый агар производства HiMedia в форме порошка предназначена для поддержания и субкультивирования микроорганизмов, включая требовательные культуры. Среда применяется для выявления подвижности и изучения ферментации углеводов; для ферментационных исследований требуется добавление соответствующего углевода в концентрации 0,5–1,0 %.

Назначение и область применения

Цистин-триптоновый агар применяют для:

• поддержания микроорганизмов и субкультивирования культур;
• выявления подвижности микроорганизмов;
• изучения ферментации углеводов после добавления соответствующего углевода;
• культивирования требовательных микроорганизмов без добавления обогатительных компонентов;
• поддержания изолированных микроорганизмов, включая Brucella, Corynebacterium, Pasteurella, Pneumococcus и Streptococcus;
• изучения ферментации сахаров микроорганизмами, которые не растут на классических средах с феноловым красным.

Тип образца: изолированный микроорганизм.

Состав

Состав среды на 1 л:

Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Принцип действия и интерпретация результатов

Цистин-триптоновый агар представляет собой простую полутвёрдую среду для размножения и поддержания бактерий, в том числе требовательных микроорганизмов, без добавления вспомогательных компонентов. Формула среды была разработана Vera для идентификации и поддержания Gonococcus и других бактерий.

При глубинном посеве в среде могут длительно поддерживаться требовательные микроорганизмы, включая Brucella, Corynebacterium, Pasteurella, Pneumococcus и Streptococcus, без дополнительных обогатителей, если среда хранится при подходящей температуре. Некоторые светочувствительные анаэробные микроорганизмы способны расти в этой среде без специальных условий; при пониженном содержании кислорода они демонстрируют хороший рост.

Максимальная эффективность среды достигается при использовании свежеприготовленной среды. При длительном хранении необходимо предотвращать обезвоживание; для этого рекомендуется использовать завинчивающиеся крышки или обеспечивать надёжную герметизацию.

Анаэробные микроорганизмы, включая Actinomyces bovis, Bacteroides funduliformis и Leptotrichia, хорошо растут в среде в присутствии CO₂. При добавлении углевода среда позволяет изучать ферментацию сахаров. Подкисление среды выявляют по изменению цвета индикатора фенолового красного.

В полутвёрдом агаре кислотные реакции выявляются легче, чем в бульоне, поскольку образующаяся кислота не распространяется сразу по всему объёму культуры. При отсутствии сбраживаемого углевода большинство культур демонстрирует щелочную реакцию. Подвижность выявляют по характеру распространения роста:

• подвижные культуры растут за пределами линии посева;
• неподвижные микроорганизмы растут в области инокуляции вдоль линии прокола, а окружающая среда остаётся прозрачной.

Триптон и L-цистин обеспечивают питательные вещества, необходимые для роста требовательных микроорганизмов. Ферментацию углеводов выявляют по видимому изменению цвета среды за счёт индикатора pH — фенолового красного. При метаболизме углевода микроорганизмами образуются органические кислоты, и среда подкисляется.

Пептоны, присутствующие в среде, также расщепляются бактериями с образованием веществ со щелочной реакцией. Индикатор феноловый красный изменяет цвет с красно-оранжевого на жёлтый, когда количество кислоты, образованной при ферментации углевода, превышает щелочное действие продуктов расщепления пептонов. Изменение цвета фенолового красного происходит примерно при pH 6,8, близком к исходному значению pH среды.

Методика инокуляции и культивирования

Для ферментационных исследований представителей рода Neisseria инокулируют только поверхность среды в пробирке.

Для факультативных организмов, например стрептококков, и для строго анаэробных организмов инокуляцию выполняют проколом центра среды инокулирующей иглой примерно на половину глубины столбика среды.

Инкубацию проводят с ослабленными крышками — в аэробных или анаэробных условиях в зависимости от исследуемого микроорганизма:

• Neisseria инкубируют с неплотно закрытыми крышками;
• допускается инкубация в атмосфере CO₂;
• при инкубации без CO₂ крышки должны быть плотно закрыты;
• для более быстрого роста и ускоренного протекания ферментационных реакций анаэробные культуры предпочтительно инкубировать в присутствии CO₂, а также водорода или азота.

Некоторые строгие анаэробы не растут либо растут плохо в отсутствие CO₂.

Интерпретация ферментации и роста

• Жёлтая окраска в верхней трети столбика или по всему объёму среды указывает на образование кислоты в результате ферментации углевода.
• Красная окраска, соответствующая щелочной реакции, или оранжевая окраска, соответствующая нейтральной реакции, указывает, что углевод не расщеплялся и использовались только пептоны.
• Инокулированная среда без углевода также приобретает окраску от красной до оранжевой.
• Для этой среды требуется высокая посевная доза.
• При длительной инкубации возможны изменения индикатора pH или аномальные реакции с лактозой и сахарозой у патогенных представителей Neisseria.
• Виды Neisseria обычно образуют кислоту только в области проколов — в верхней трети столбика.
• Сильное пожелтение по всему объёму среды может указывать на присутствие контаминирующего микроорганизма.
• Для подтверждения присутствия видов Neisseria необходимо выполнить окраску по Граму и оксидазный тест на выросшей культуре.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 28,51 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду в пробирки по 8–10 мл.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. При необходимости добавьте соответствующий углевод в концентрации 0,5–1,0 %.
7. Тщательно перемешайте.
8. Оставьте пробирки охлаждаться в вертикальном положении.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или светло-розовый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Полутвёрдый гель, сопоставимый с 0,25%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде столбиков формируется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

Реакция среды

Реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 2,85 % при 25 °C: pH 7,3 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 4–18 ч или дольше, если это необходимо.

* Соответствующие номера WDCM.

Тип образца и обращение с ним

Для образцов изолированных микроорганизмов применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов в соответствии с установленными руководствами и местными нормативными требованиями.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Недостаточная посевная доза может привести к получению ложных результатов.
2. Не выполняйте посев до дна пробирки. Неправильная инокуляция может привести к слабым кислотным реак