HiMedia M1542-100G Основа среды Лёвенштейна-Йенсена без крахмала

Компонент питательной среды HiMedia M1542-100G Основа среды Лёвенштейна-Йенсена без крахмала — химически определённая порошкообразная основа для приготовления среды Лёвенштейна—Йенсена. Основа предназначена для тестирования лекарственной устойчивости микобактерий; масса упаковки составляет 100 г, рабочая температура хранения сухого продукта — 10–30 °C.

Назначение

Основа среды Лёвенштейна—Йенсена без крахмала предназначена для тестирования лекарственной устойчивости микобактерий в соответствии с рекомендациями Всемирной организации здравоохранения.

Тип образца: клинический образец — мокрота.

В отличие от среды Лёвенштейна—Йенсена с картофельным крахмалом, состав M1542 не содержит крахмал; лекарственные препараты при необходимости добавляют до уплотнения среды.

Технические характеристики

Состав

Состав рассчитан на 600 мл среды.

Состав скорректирован и стандартизирован для обеспечения заданных рабочих параметров.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 7,24 г порошка в 600 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина.
2. Для выращивания бычьих бактерий или других глицерофобных организмов глицерин не добавляйте.
3. При необходимости нагревайте суспензию до полного растворения среды.
4. Стерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Одновременно асептически приготовьте 1000 мл эмульсии цельного яйца.
6. Осторожно добавьте основу к эмульсии цельного яйца и перемешайте до получения однородной смеси.
7. Распределите смесь по стерильным пробиркам с завинчивающимися крышками.
8. Разместите пробирки в наклонном положении.
9. Коагулируйте и уплотните среду в аппарате для уплотнения сред, водяной бане или автоклаве при 85 °C в течение 45 мин.

Принцип действия и интерпретация

Исходная среда Лёвенштейна была разработана Lowenstein, а затем модифицирована Jensen и Gruft с добавлением двух антимикробных компонентов. Основа среды Лёвенштейна—Йенсена без крахмала предназначена для тестирования устойчивости микобактерий. Среда Лёвенштейна—Йенсена без картофельного крахмала с лекарственными препаратами, внесёнными до уплотнения, представляет собой модификацию среды Международного союза борьбы с туберкулёзом (IUAT).

Малахитовый зелёный подавляет рост большинства контаминантов, сохранившихся после процедур деконтаминации образца, что способствует наиболее раннему возможному росту микобактерий. Не добавляйте глицерин в среду, если планируется культивирование бычьих или других глицерофобных штаммов.

Малахитовый зелёный выполняет функции ингибитора и индикатора pH:

• образование синей зоны указывает на снижение pH под воздействием грамположительных контаминантов, например стрептококков;
• жёлтые зоны указывают на разрушение красителя грамотрицательными палочками;
• протеолитические контаминанты вызывают локальное или полное разжижение среды.

Hardy и соавторы рекомендовали инокулировать и инкубировать каждый образец в трёх повторностях для следующих целей:

• выявления сапрофитов при комнатной температуре 25 °C;
• определения наличия или отсутствия пигментации у фотоchromогенных и скотохромогенных микобактерий при температуре 35 °C с чередованием освещения и темноты в зависимости от типа организма.

В стандартном режиме культивирование проводят аэробно при 35 °C.

Для стандартных процедур деконтаминации и выделения следует использовать соответствующие методические руководства.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают в присутствии 5–10 % углекислого газа (CO₂), с добавленной основой эмульсии яйца, после инкубации при 35–37 °C в течение 2–4 недель.

Контроль качества

Внешний вид

Цвет: зеленовато-синий до павлинье-синего.

Состояние: однородный, сыпучий порошок без комков.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Смесь стерильной базовой среды и эмульсии цельного яйца после уплотнения коагулирует с образованием непрозрачных гладких скошенных поверхностей бледного голубовато-зелёного цвета.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для клинических образцов используйте стандартные методики деконтаминации и выделения микобактерий.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Разные организмы имеют индивидуальные требования к условиям роста и могут демонстрировать неодинаковые варианты роста на среде.
2. Каждая серия среды протестирована на организмы, указанные в сертификате анализа (COA). При использовании среды для конкретного микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, рекомендуется валидировать пригодность среды с учётом специфических требований пользователя.

Условия эксплуатации, хранения и срок годности

• Хранение сухого продукта: в плотно закрытой ёмкости при 10–30 °C.
• Хранение приготовленной среды: при 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия: хранить продукт в сухом виде, плотно закрыв флакон, чтобы предотвратить образование комков вследствие гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Место хранения: сухое, вентилируемое, защищённое от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования контейнер необходимо плотно закрывать.
• Для сохранения рабочих характеристик продукт следует использовать в течение установленного срока годности.

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при приготовлении и применении в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованных условиях.

Требования безопасности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической работы.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с утверждёнными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Пользователь обязан обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов путём автоклавирования и/или сжигания.

Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, необходимо деконтаминировать и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками обращения с инфекционными материалами.