Питательная агаровая среда HiMedia M1540I-1KT HiCrome агар для листерий Оттавиани-Агости в порошковой форме предназначена для селективного и дифференциального выделения Listeria monocytogenes. Среда применяется для анализа пищевых продуктов, кормов для животных и образцов окружающей среды в зонах производства и обращения пищевой продукции; дифференциация основана на активности фосфатидилинозитол-специфичной фосфолипазы C (PIPLC).

Назначение

Среда предназначена для селективного и дифференциального выделения Listeria monocytogenes. Состав и критерии эффективности соответствуют требованиям ISO 11290-1:2017 и ISO 11290-2:2017.

Состав

Базовая среда M1540I

HiCrome агар для листерий Оттавиани—Агости, основание M1540I:

• Конечный pH: 7,2 ± 0,2 при 25 °C.
• Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных параметров эффективности.

• Эквивалент пептического ферментативного гидролизата тканей животных.

• Эквивалент ферментативного гидролизата казеина.

Добавки после автоклавирования

FD212A — селективная добавка OA, 2 флакона

FD214 — обогатительная добавка LP 1, 2 флакона

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 36,02 г порошка в 465 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте стерильное содержимое 1 флакона обогатительной добавки LP 1 (FD214) и стерильное регидратированное содержимое селективной добавки OA (FD212A).
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Listeria monocytogenes — грамположительный пищевой патоген человека, способный вызывать тяжёлые инфекции у беременных женщин, включая выкидыш, мертворождение, рождение ребёнка с неонатальным листериозом и менингитом, а также первичную бактериемию у взрослых и детей. Патогенность Listeria ivanovii для человека остаётся неопределённой.

L. monocytogenes и L. innocua обладают сходными биохимическими свойствами, поэтому не дифференцируются на традиционных средах PALCAM и Oxford. Среда основана на рецептуре Оттавиани и Агости для селективного и дифференциального выделения L. monocytogenes из пищевых продуктов и кормов для животных; рецептура принята комитетом ISO.

Питательные компоненты действуют следующим образом:

• пептон HM, триптон и дрожжевой экстракт обеспечивают среду азотистыми и углеродистыми соединениями, аминокислотами с длинной цепью, витаминами и другими необходимыми питательными веществами;
• пируват натрия обеспечивает необходимые для роста питательные вещества;
• глюкоза (декстроза) является ферментируемым углеводом;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• фосфат выполняет буферную функцию;
• хлорид лития и селективные добавки FD212A подавляют сопутствующую микрофлору и обеспечивают рост видов Listeria;
• виды Listeria гидролизуют хромогенный субстрат 5-бром-4-хлор-3-индолил-β-D-глюкопиранозид, в результате чего образуются колонии от сине-зелёного до зелёно-синего цвета;
• дифференциация L. monocytogenes от других видов Listeria основана на активности фосфатидилинозитол-специфичной фосфолипазы C (PIPLC);
• фермент фосфолипаза C гидролизует очищенный субстрат FD214, добавленный в среду, с образованием непрозрачного ореола вокруг колоний L. monocytogenes.

Образцы

Типы исследуемых образцов:

• пищевые продукты;
• корма для животных;
• образцы окружающей среды в зонах производства и обращения пищевой продукции.

Сбор и обращение с образцами

При работе с пищевыми продуктами, кормами для животных и образцами окружающей среды следует применять соответствующие методики обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами. После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры безопасности

• Перед открытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения метода

1. Некоторые штаммы L. monocytogenes, подвергшиеся стрессовым воздействиям, особенно кислотному стрессу, могут образовывать очень слабый ореол или не образовывать его совсем.
2. Для дифференциации L. monocytogenes и L. ivanovii необходимо провести дополнительные биохимические тесты, поскольку оба вида демонстрируют непрозрачный ореол вследствие активности PIPLC.
3. Некоторые микроорганизмы, не относящиеся к виду Listeria, также могут образовывать на этой среде синие колонии; для дифференциации требуется биохимическая идентификация.
4. Для подтверждения результата необходимо провести дополнительные биохимические и серологические исследования.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид порошка: однородный, сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: в чашках Петри образуется светло-янтарный опалесцирующий гель.

Реакция и pH

• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 7,2 % масс./об. при 25 °C.
• pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Продуктивность, специфичность и селективность оценивают для среды с добавленными стерильными селективной добавкой OA (FD212A) и обогатительной добавкой LP 1 (FD214) после инкубации при 37 °C ± 1 °C в течение 48 ч ± 4 ч.

Для оценки продуктивности коэффициент восстановления принимают за 100 % при росте бактерий на референсной среде — агаре с переваром соевого казеина (соевый триптиказо-агар). Характерные реакции сравнивают с реакциями ранее одобренной серии.

Для оценки специфичности характерные реакции сравнивают с реакциями ранее одобренной серии.

Для оценки селективности характерные реакции также регистрируют после инкубации при 37 °C ± 1 °C в течение 48 ч ± 4 ч.