Селективная и дифференциальная питательная среда HiMedia M1540I-100G HiCrome агар для листерий Оттавиани-Агости предназначена для выделения Listeria monocytogenes. Среда применяется для анализа пищевых продуктов, кормов и проб окружающей среды, а дифференциация основана на активности фосфолипазы C, специфичной к фосфатидилинозитолу.

Назначение

Среда рекомендована для селективного и дифференциального выделения Listeria monocytogenes. Состав и критерии эффективности соответствуют требованиям ISO 11290-1:2017 и ISO 11290-2:2017.

Тип изделия: агар
Форма: порошок
Масса: 100 г
Производитель: HiMedia
Материал упаковки: HDPE (полиэтилен высокой плотности)
Происхождение компонентов: животное

Состав

M1540I — основа агара HiCrome для листерий Оттавиани-Агости:

Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

— эквивалент ферментативного переваривания тканей животного происхождения.

— эквивалент ферментативного переваривания казеина.

Добавляемые после автоклавирования добавки

FD212A — 2 флакона: селективная добавка OA:

FD214 — 2 флакона: обогатительная добавка LP 1:

Методика приготовления

1. Суспендируйте 36,02 г порошка в 465 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов силы на квадратный дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте стерильное содержимое 1 флакона обогатительной добавки LP 1 (FD214) и стерильно регидратированное содержимое селективной добавки OA (FD212A).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Listeria monocytogenes — грамположительный пищевой патоген человека, вызывающий тяжёлые инфекции у беременных женщин, которые могут приводить к аборту, мертворождению, рождению ребёнка с неонатальным листериозом и менингитом, а также к первичной бактериемии у взрослых и детей.

Патогенность Listeria ivanovii для человека остаётся неопределённой. L. monocytogenes и L. innocua обладают сходными биохимическими свойствами, поэтому не могут быть дифференцированы на традиционных средах PALCAM и Oxford.

Среда основана на рецептуре Оттавиани и Агости для селективного и дифференциального выделения L. monocytogenes из пищевых продуктов и кормов для животных; рецептура принята комитетом ISO. Среда также рекомендована APHA и FDA-BAM.

Функции компонентов:

• пептон HM, триптон и дрожжевой экстракт поставляют азотсодержащие и углеродсодержащие соединения, аминокислоты с длинной цепью, витамины и другие необходимые питательные вещества;
• пируват натрия обеспечивает необходимые питательные вещества для роста;
• глюкоза (декстроза) служит ферментируемым углеводом;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• фосфат выполняет буферную функцию;
• хлорид лития и селективная добавка FD212A подавляют сопутствующую микрофлору и обеспечивают рост видов Listeria;
• виды Listeria гидролизуют хромогенный субстрат 5-бром-4-хлор-3-индолил-β-D-глюкопиранозид, в результате чего образуются колонии от синего до зелёного цвета;
• дифференциация L. monocytogenes от других видов Listeria основана на активности фосфатидилинозитол-специфичной фосфолипазы C (PIPLC);
• фермент фосфолипаза C гидролизует очищенный субстрат FD214, добавленный в среду, с образованием непрозрачного ореола вокруг колоний L. monocytogenes.

Образцы

Типы образцов:

• пищевые продукты;
• корма для животных;
• пробы окружающей среды в зонах производства и обращения с пищевыми продуктами.

Отбор и обращение с образцами

При работе с пищевыми продуктами, кормами для животных и пробами окружающей среды применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: в чашках Петри образуется гель светло-янтарного цвета с опалесценцией.

Реакция и pH

Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 7,2 % масс./об. при 25 °C.
pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Продуктивность: культуральные характеристики определяют после добавления стерильной селективной добавки OA (FD212A) и обогатительной добавки LP 1 (FD214), после инкубации при 37 °C ± 1 °C в течение 48 ч ± 4 ч. Степень восстановления принимают равной 100 % для роста бактерий на референсной среде — соево-казеиновой агаровой среде (триптон-соевом агаре). Характерную реакцию сравнивают с ранее утверждённой серией.

Специфичность: культуральные характеристики определяют после добавления стерильной селективной добавки OA (FD212A) и обогатительной добавки LP 1 (FD214), после инкубации при 37 °C ± 1 °C в течение 48 ч ± 4 ч. Характерную реакцию сравнивают с ранее утверждённой серией.

Селективность: культуральные характеристики определяют после добавления стерильной селективной добавки OA (FD212A) и обогатительной добавки LP 1 (FD214), после инкубации при 37 °C ± 1 °C в течение 48 ч ± 4 ч.