Питательная среда «Основа тетратионатного бульона с новобиоцином Мюллера-Кауффмана HiMedia M1496I-500G (уп/500 гр)» — порошкообразная основа для приготовления селективного обогатительного бульона. Среда предназначена для улучшенного обогащения и выделения Salmonella из пищевых, кормовых, фекальных и производственно-экологических образцов; приготовленная среда нестабильна и должна использоваться сразу после приготовления.

Назначение

Основа тетратионатного бульона с новобиоцином Мюллера-Кауффмана HiMedia M1496I предназначена для улучшенного обогащения и выделения Salmonella.

Среда применяется при исследовании:

• пищевых продуктов, включая молоко и молочные продукты;
• кормов для животных;
• фекалий животных;
• образцов окружающей среды, отобранных на этапе первичного производства.

Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям ISO 6579-1:2017 и ISO 11133:2014 (E) / Amd.:2020, применяемым к методам обнаружения Salmonella и приготовлению, производству и контролю питательных сред.

Принцип действия и интерпретация

Исследование пищевых продуктов на наличие Salmonella требует методов, отличающихся от применяемых в клинических лабораториях. В пищевых продуктах обычно содержится небольшое количество Salmonella, а физиологическое состояние возбудителя может быть нарушено после воздействия стрессовых факторов при переработке или хранении.

Повреждённые клетки Salmonella восстанавливаются в неселективной бульонной среде, что облегчает обнаружение сублетально повреждённых микроорганизмов. Среда для предварительного обогащения должна обеспечивать:

• восстановление клеточных повреждений;
• разбавление токсичных или ингибирующих веществ;
• достаточную питательность для роста Salmonella.

Тетратионатный бульон был рекомендован Мюллером как селективная среда для выделения Salmonella. Кауффман модифицировал состав, добавив бычью желчь и бриллиантовый зелёный в качестве селективных компонентов для подавления, в частности, бактерий рода Proteus. Бульон с бриллиантовым зелёным и тетратионатом рекомендован для выделения Salmonella из мяса, мясных продуктов, птицы и продуктов из птицы. Среда также применяется в рамках методов обнаружения Salmonella в пищевых продуктах и других материалах.

Селективность обеспечивается тетратионатом, образующимся в результате реакции тиосульфата с йодом:

• триптон и экстракт HM служат источниками углерода, азота, витаминов и минеральных веществ;
• желчь и добавленный бриллиантовый зелёный подавляют грамположительные и другие грамотрицательные микроорганизмы;
• карбонат кальция выполняет функцию буфера;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• тиосульфат натрия является источником серы;
• анионы тетратионата S₄O₆²⁻ представляют собой основной селективный компонент среды обогащения.

Применение более чем одной селективной бульонной среды повышает вероятность выделения Salmonella из образцов, содержащих несколько серотипов.

Помимо Salmonella, в среде могут расти другие микроорганизмы, включая Morganella morganii и некоторые представители семейства Enterobacteriaceae. Все предположительно положительные колонии Salmonella необходимо подтверждать дополнительными тестами.

Состав

Состав, г/л:

Конечный pH при 25 °C: 8,0 ± 0,2.

Добавки после автоклавирования

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам эффективности.

• Эквивалент мясного экстракта.

• Эквивалент бычьей желчи.

• Эквивалент триптона, ферментативного гидролизата казеина.

• $ Раствор необходимо добавлять, но он не входит в комплект; раствор готовят непосредственно перед использованием.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 89,42 г сухой среды, что соответствует эквивалентной массе обезвоженной среды на 1 л, в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте среду только до кипения.
3. Не автоклавируйте среду.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Непосредственно перед использованием в асептических условиях добавьте регидратированное содержимое одного флакона добавки MKTT с новобиоцином (FD203).
6. Добавьте 20 мл раствора йода и йодида, приготовленного из 20 г йода и 25 г йодида калия в 100 мл стерильной дистиллированной воды.
7. Тщательно перемешайте среду для равномерного распределения карбоната кальция.
8. Разлейте среду в стерильные пробирки.

Из-за присутствия карбоната кальция приготовленная среда образует опалесцирующий раствор с белым осадком.

Пробоподготовка и схема анализа

Предварительное обогащение

В соответствии с ISO 6579-1:2017 образец массой 25 г предварительно обогащают в 225 мл буферной пептонной воды M1494I. Инкубируют при 34–38 °C в течение 18 ч ± 2 ч.

Селективное обогащение

1. Внесите 0,1 мл предварительно обогащённого образца в 10 мл бульона RVS M1448I или в модифицированный полужидкий агар MSRV M1428I.
2. Инкубируйте при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
3. Внесите 1 мл полученной культуры в бульон MKTTn M1496I.
4. Инкубируйте при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.

Выделение

Полученную культуру высейте на модифицированный ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар (XLD), M031I, и инкубируйте при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч. Одновременно выполните посев на вторую изолирующую агаризованную