Основа агара с полимиксином, яичным желтком, маннитом и БТБ HiMedia M1484-500G (уп/500 гр)

Питательная агаровая основа Основа агара с полимиксином, яичным желтком, маннитом и БТБ HiMedia M1484-500G (уп/500 гр) — порошковая селективная среда PEMBA для культивирования Bacillus cereus. Применяется для выделения и количественного определения Bacillus cereus в пищевых и молочных образцах; Bacillus cereus на среде неотличим от Bacillus thuringiensis по культуральным признакам и требует дополнительных биохимических тестов для подтверждения.

Назначение

Основа агара с полимиксином, яичным желтком, маннитом и бромтимоловым синим (PEMBA) предназначена для культивирования, выделения и количественного определения Bacillus cereus в пищевых и молочных образцах.

Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям ISO 21871:2006. Среда также применяется в соответствии с методиками микробиологического исследования пищевых продуктов, кормов для животных и воды, включая требования EN ISO 11133:2014 с поправкой 2020 года.

Состав

Содержание компонентов указано в г/100 мл:

Конечный pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 4,39 г порошка в 90 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов — ориентировочно ≈0,103 МПа — при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте стерильное регидратированное содержимое одного флакона добавки PEMBA FD200.
6. Добавьте 5 мл стерильной эмульсии яичного желтка FD045.
7. Тщательно перемешайте.
8. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Для получения селективной среды конечная концентрация сульфата полимиксина B должна составлять 100 ЕД/мл среды. Для подавления роста плесневых грибов допускается применение циклогексимида в концентрации 4 мг/л.

Принцип действия и интерпретация

Bacillus cereus — аэробная спорообразующая бактерия, широко встречающаяся в почве и выделяемая из различных овощей, сырых и переработанных пищевых продуктов. Бактерия может вызывать пищевые отравления при употреблении контаминированных сырых овощей, проростков, мяса, заварных кремов, супов, варёного или жареного риса.

Bacillus cereus также вызывает глазные инфекции и ряд других клинических состояний, включая образование абсцессов, менингит, септицемию и инфицирование ран. Бактерия является известной причиной мастита, особенно у овец и тёлок.

PEMBA, разработанная по формуле Холбрука и Андерсона, представляет собой селективную среду для выделения и количественного определения Bacillus cereus из пищевых продуктов. Селективность обеспечивается полимиксином и критической концентрацией питательных компонентов. Среда поддерживает рост небольшого количества клеток и спор Bacillus cereus в пищевых образцах с высокой общей микробной обсеменённостью.

Принцип действия компонентов среды:

• низкое содержание пептона стимулирует спорообразование;
• пируват натрия уменьшает размер колоний микроорганизмов;
• эмульсия яичного желтка выявляет выраженную реакцию помутнения, обусловленную лецитиназой;
• бромтимоловый синий служит индикатором pH и выявляет ферментацию маннита;
• сульфат полимиксина B обеспечивает селективность в отношении Bacillus cereus;
• циклогексимид может применяться для ингибирования плесневых грибов.

Bacillus cereus образует на среде зубчатые сине-бирюзовые колонии, окружённые зоной помутнения или преципитации. Некоторые штаммы Bacillus cereus дают очень слабую реакцию с яичным желтком. На PEMBA Bacillus cereus неотличим от Bacillus thuringiensis, поэтому для подтверждения идентификации необходимо дополнительно исследовать биохимические признаки.

Тип образцов

• пищевые образцы;
• молочные образцы.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим методическим указаниям.

После использования контаминированные материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Культуральные характеристики и контроль эффективности

Продуктивность

Культуральные характеристики определяют после добавления PEMBA FD200 и эмульсии яичного желтка FD045 и инкубации при 37 ± 1 °C в течение 21 ± 3–44 ± 4 ч.

Коэффициент восстановления принимают равным 100 % по отношению к росту бактерий на референсной среде — соево-казеиновом агаре, также называемом триптон-соевым агаром.

Селективность

Культуральные характеристики определяют после добавления PEMBA FD200 и эмульсии яичного желтка FD045 и инкубации при 37 ± 1 °C в течение 44 ± 4 ч.

Специфичность

Культуральные характеристики определяют после добавления PEMBA FD200 и эмульсии я