Основа модифицированной полужидкой среды RV HiMedia M1482-500G (уп/500 гр)

Микробиологическая питательная среда — основа модифицированной полужидкой среды RV HiMedia M1482-500G (уп/500 гр), производство HiMedia, для выявления подвижных видов Salmonella в пищевых продуктах и пробах окружающей среды. Основа применяется для селективного выделения подвижных Salmonella методом миграции в полужидком геле и не подходит для обнаружения неподвижных штаммов Salmonella.

Назначение

Основа модифицированной полужидкой среды RV предназначена для выделения подвижных видов Salmonella из клинических, пищевых проб и образцов окружающей среды. Среда может использоваться в сочетании с прямым посевом или после обогащения в селенитном бульоне F (M052).

Для выделения видов Salmonella применяют агар XLD (M031). Пересев на агар XLD (M031) или маннитол-лизиновый агар (M1071) повышает степень восстановления микроорганизмов. Среда не подходит для обнаружения неподвижных штаммов Salmonella.

Состав

Состав рассчитан на 1 л среды:

Формула откорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Технические характеристики

• Тип продукта: стандартный
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Физическая форма: порошок
• Происхождение: животное
• Тип упаковки: HDPE — полиэтилен высокой плотности
• Фасовка: 500 г
• Сертификат: ФСЗ 2009/03705
• Конечный pH при 25 °C: 5,5 ± 0,2
• Содержание агара: 0,257 % в составе среды; гелирование сопоставимо с 0,26 % агаровым гелем
• Цвет и прозрачность готовой среды: синий прозрачный или слегка опалесцирующий гель в чашках Петри либо в пробирках в виде столбиков

Принцип действия и интерпретация

Виды Salmonella обладают способностью мигрировать в селективной среде, конкурируя с другими подвижными микроорганизмами. В результате вокруг места внесения посевного материала формируется непрозрачный ореол или зона роста.

Полужидкая консистенция среды позволяет дифференцировать подвижные Salmonella от неподвижных микроорганизмов. Подвижные бактерии образуют ореол роста, исходящий из точки инокуляции. В чашках Петри ореол выглядит как непрозрачная зона, распространяющаяся от места внесения; в столбике среды непрозрачный рост распространяется в стороны от линии укола.

Специальный пептон обеспечивает азотистые и углеродистые соединения, а также другие необходимые для роста питательные вещества. Дрожжевой экстракт служит источником витаминов группы B. Фосфат обеспечивает буферную ёмкость среды. Малахитовый зелёный выполняет функцию селективного агента. Новобиоцин, добавляемый с селективной добавкой IMRV/RV (FD193), избирательно подавляет большинство грамположительных микроорганизмов.

Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды. Salmonella обычно сохраняет жизнеспособность при несколько повышенном осмотическом давлении, обусловленном присутствием MgCl₂, растёт при несколько пониженном pH и более устойчива к малахитовому зелёному по сравнению с другими бактериями. Совокупность этих факторов обеспечивает селективность среды при выделении Salmonella.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 32,95 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при 115 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки IMRV/RV (FD193).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в соответствии с назначением — в виде столбиков в пробирки или в чашки Петри.

Методика проведения анализа

1. Используйте предобогащённую культуру, выдержанную 16–20 ч.
2. Внесите по 3 капли, или 0,1 мл, предобогащённой культуры на отдельные участки предварительно высушенной поверхности готовой среды.
3. Инкубируйте чашки Петри в вертикальном положении при 42 °C не более 24 ч.
4. Оцените наличие ореола или зоны непрозрачного роста, исходящей из места инокуляции.
5. Колонии Salmonella имеют соломенно-жёлтую окраску.
6. Для подтверждения чистоты культуры и последующих биохимических и серологических исследований выполните пересев с внешнего края ореола.

Ограничения при проведении анализа

Подвижность Salmonella может резко снижаться при чрезмерном высыхании поверхности агара. Чашки Петри необходимо хорошо высушить до использования. При появлении видимой влаги на крышке чашки или поверхности агара влагу необходимо удалить.

Во время инкубации чашки должны находиться в аэробных условиях и в вертикальном положении. Продолжительность инкубации не должна превышать 24 ч; температура инкубации устанавливается в соответствии с используемой методикой.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или светло-синий однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Полужидкий гель, сопоставимый с 0,26 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри или пробирках в виде столбиков образуется синий прозрачный или слегка опалесцирующий гель.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 3,29 % масс./об. при 25 °C: pH 5,5 ± 0,2.

Значение pH

pH: 5,30–5,70.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяли после инкубации в течение 18–24 ч при различных температурах с добавлением селективной добавки IMRV/RV (FD193).

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухой основы: ниже 30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Срок использования: до даты, указанной на этикетке

Техническое отличие методики

В отличие от стандартных плотных селективных сред, полужидкая основа позволяет регистрировать подвижность Salmonella по радиальному распространению непрозрачного роста от точки инокуляции.