Основа агара PLET (модифицированный) HiMedia M1451-500G (уп/500 гр)

Компонент питательной среды «Основа агара PLET (модифицированный) HiMedia M1451-500G (уп/500 гр)» — порошковая основа для приготовления селективной агаровой среды. Основа предназначена для выделения и количественного определения Bacillus anthracis и подавляет рост большинства штаммов Bacillus cereus, а также ряда других микроорганизмов-контаминантов.

Назначение

Основа агара PLET (модифицированный) рекомендована для выделения и количественного определения Bacillus anthracis из клинических и природоохранных образцов.

Среда применяется для культивирования B. anthracis в подозрительных образцах окружающей среды, продуктах животного происхождения и клиническом материале. Модифицированная основа отличается от исходной повышенной концентрацией ЭДТА, что способствует подавлению роста Staphylococcus aureus.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

# Эквивалент настоя из говяжьего сердца.

Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 40,40 г порошка в 990 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки для PLET (FD185).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Сибирская язва — инфекционное заболевание, вызываемое спорами бактерии Bacillus anthracis. При кожной форме заболевания у человека Bacillus anthracis обычно выявляется в материале из злокачественной пустулы; при лёгочной форме — иногда в мокроте, а при септической стадии любой формы инфекции — также в крови.

Человек относительно устойчив к сибирской язве, поэтому лабораторные сотрудники заражаются редко. Однако необходимо принимать особые меры, чтобы предотвратить попадание спор, длительно сохраняющихся во внешней среде, в лабораторное помещение; все процедуры следует выполнять в шкафу биологической безопасности. Сибирская язва не передаётся непосредственно от человека к человеку, однако споры могут переноситься одеждой, обувью и другими предметами. Заражение человека происходит при контакте с погибшими инфицированными животными, употреблении заражённых тканей животных или воздействии спор низкой концентрации, содержащихся в шерсти, мехе, шкурах и других материалах животного происхождения.

Основа агара PLET, первоначально разработанная Книсли, представляет собой селективную среду для культивирования B. anthracis из предполагаемо заражённых образцов окружающей среды, продуктов животного происхождения или клинического материала с подавлением роста Bacillus cereus. Модифицированная основа агара PLET содержит повышенную концентрацию ЭДТА, которая способствует подавлению Staphylococcus aureus.

Настой HM B из сухого сырья и триптоза обеспечивают углеродистые и азотистые соединения, необходимые для роста микроорганизмов. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие. Ацетат таллия и полимиксин, входящий в селективную добавку FD185, являются ингибирующими агентами: они обеспечивают рост B. anthracis и подавляют контаминирующую микрофлору. Лизоцим из состава FD185 специфически подавляет рост грамотрицательных контаминантов.

Подозрительный образец можно непосредственно использовать для посева штриховым методом. Также для посева допускается использовать образцы, предварительно обработанные нагреванием или спиртом.

После инкубации при 37 °C в течение 24 ч колонии формируются у 30–100 % спор B. anthracis, способных вырасти на неселективном агаре для инфузии сердца (HI Agar, M169). На модифицированной среде PLET такие колонии меньше и более гладкие, чем на HI Agar.

Модифицированная основа агара PLET подавляет рост большинства штаммов B. cereus, B. subtilis, других видов рода Bacillus, представителей семейства Enterobacteriaceae и видов рода Pseudomonas. Некоторые штаммы B. cereus, происходящие из почвы, образуют колонии, однако через 24 ч они меньше колоний B. anthracis и имеют точечный размер, а через 48 ч достигают умеренного размера.

Колонии B. anthracis появляются через 36–40 ч инкубации при 37 °C. Колонии имеют примерно круглую форму, кремово-белый цвет и текстуру, напоминающую матовое стекло. Для идентификации их дополнительно пересевают на чашки с кровяным агаром. Образование капсулы можно наблюдать непосредственно на среде или на чашках с кровяным агаром.

Образцы

Тип образца:

• клинический материал;
• образцы окружающей среды.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов и образцов окружающей среды применяйте соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным методическим требованиям.

После использования контаминированные материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры безопасности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным методическим требованиям.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.
• Все процедуры следует выполнять в шкафу биологической безопасности, чтобы предотвратить распространение спор Bacillus anthracis в лабораторной среде.

Ограничения

Колонии B. anthracis примерно круглой формы, кремово-белого цвета, с текстурой матового стекла необходимо дополнительно пересевать на чашки с кровяным агаром для идентификации. Образование капсулы можно наблюдать непосредственно на среде или на чашках с кровяным агаром.

Контроль качества

Внешний вид: однородный, легко сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 4,04 % мас./об. при 25 °C.

pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики: оцениваются после инкубации при 35–37 °C в течение 36–40 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при применении согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованных условиях.

Технические характеристики