HiMedia M144I-500G Основа колумбийского кровяного агара

Основа питательной среды HiMedia M144I-500G Основа колумбийского кровяного агара — порошковый препарат массой 500 г. Предназначена для селективного выявления и количественного определения бактерий рода Campylobacter в пищевых продуктах с последующим подтверждением биохимическими и серологическими тестами.

Назначение и область применения

Основа колумбийского кровяного агара предназначена для селективного выявления и количественного определения видов Campylobacter в пищевых продуктах. Состав и показатели эффективности среды соответствуют требованиям ISO 10272-1:2017, ISO 10272-2:2017 и ISO 11133:2014/Amd. 2:2020.

Тип образца: пищевые продукты.

Среда используется для выделения колоний Campylobacter после селективного обогащения в бульоне Bolton или Preston и последующего пересева на агар mCCD.

Состав

Спецификация ISO для колумбийского кровяного агара

Состав на 1 л:

Добавки после автоклавирования

Основа колумбийского кровяного агара M144I

Состав на 1 л:

После приготовления добавляют 5 % об./об. стерильной дефибринированной крови овцы.

Добавка крови и конечный pH

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия показателям эффективности. Источник ферментативного переваривания — ткани животного происхождения.

Принцип действия и интерпретация

Бактерии рода Campylobacter обитают в кишечном тракте животных и поэтому могут загрязнять пищевые продукты животного происхождения. Campylobacter вызывает кишечные расстройства или аборты у животных и является одной из значимых причин гастроэнтерита у человека, особенно у детей.

Основа колумбийского кровяного агара разработана Ellner и соавторами и рекомендована комитетом ISO для выявления и количественного определения видов Campylobacter.

• Пептон поддерживает быстрый и обильный рост требовательных и нетребовательных микроорганизмов.
• Среда способствует формированию типичной морфологии колоний, лучшему образованию пигмента и более чётко выраженным гемолитическим реакциям.
• Крахмал служит источником энергии и нейтрализует токсичные метаболиты.
• Баранья кровь позволяет выявлять гемолиз и служит источником гема, или фактора X, необходимого для роста многих бактерий.
• Баранья кровь не содержит фактора V — никотинамидадениндинуклеотида; поэтому Haemophilus influenzae, которому необходимы одновременно факторы X и V, на этой среде не растёт.
• Из-за относительно высокого содержания углеводов β-гемолитические стрептококки могут давать зеленоватую гемолитическую реакцию, которую можно ошибочно принять за α-гемолиз.
• Для всех выделенных колоний необходимо проводить подтверждающие тесты.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 44,0 г препарата в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 44–47 °C.
5. В асептических условиях добавьте 5 % об./об. стерильной дефибринированной крови овцы.
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Пробоподготовка и проведение анализа

Процедура предназначена для анализа пищевых продуктов в соответствии с методикой обработки образцов.

Первичная суспензия и селективное обогащение A

Для приготовлении первичной суспензии:

1. Соедините 10 г или 10 мл исследуемой пробы с 90 мл среды обогащения — бульона Bolton (M1592), предназначенного для приготовленных и замороженных пищевых продуктов.
2. Инкубируйте первичную суспензию в микроаэрофильной атмосфере при 37 ± 1 °C в течение 4–6 ч.
3. Затем продолжайте инкубацию при 41,5 ± 1 °C в течение 44 ± 4 ч.

Селективное обогащение B

Для сырых мясных продуктов или сырого молока:

1. Соедините 10 г или 10 мл исследуемой пробы с 90 мл среды обогащения — бульона Preston (M8991).
2. Инкубируйте первичную суспензию в микроаэрофильной атмосфере при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.

Высев на селективную среду

1. Используйте культуру, полученную в среде обогащения.
2. Стерильной петлёй объёмом 10 мкл инокулируйте поверхность агара mCCD (M887I).
3. Инкубируйте чашки при 41,5 ± 1 °C в микроаэрофильной атмосфере в течение 44 ± 4 ч.

Селективное обогащение C

Для проб из слепой кишки или фекальных образцов:

1. Непосредственно нанесите материал на агар mCCD мазком или штриховым посевом с использованием петли либо стерильного тампона.
2. Использование второй среды может быть необязательным.
3. Инкубируйте чашки при 41,5 ± 1 °C в микроаэрофильной атмосфере в течение 44 ± 4 ч.

Отбор колоний для подтверждения

1. Отберите колонии с агара mCCD (M887I).
2. Пересевайте отобранные колонии на основу колумбийского кровяного агара.
3. Инкубируйте при 41,5 ± 1 °C в течение 24–48 ч в микроаэрофильных условиях.

Подтверждение

Для подтверждения проводят биохимические и серологические тесты. Для дальнейшего подтверждения принадлежности к Campylobacter необходимо выполнить оксидазный тест, каталазный тест, гиппуратный тест и гидролиз индоксилацетата.

Ограничения применения

1. Отдельные микроорганизмы различаются по требованиям к условиям роста и могут демонстрировать на среде вариабельные характеристики роста.
2. Каждая партия среды проверяется на микроорганизмы, указанные в сертификате анализа. При необходимости применения среды для конкретного микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, пользователь должен самостоятельно валидировать среду с учётом требований конкретной методики.
3. Зеленоватая гемолитическая реакция β-гемолитических стрептококков может быть ошибочно интерпретирована как α-гемолиз; для всех колоний требуются подтверждающие тесты.
4. Haemophilus influenzae не растёт на среде из-за отсутствия фактора V, несмотря на наличие фактора X в составе бараньей крови.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При работе с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.
• После вскрытия плотно закрывайте контейнер для предотвращения комкования порошка, обусловленного его гигроскопичностью.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Основная среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.
• После добавления 5 % м/о стерильной дефибринированной крови: в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.

Реакция

Реакция 4,4 % м/о водного раствора при 25 °C.

pH: