HiMedia M144I-500G Основа колумбийского кровяного агара

Основа колумбийского кровяного агара HiMedia M144I-500G (производство HiMedia) предназначена для селективного выделения и подсчета видов Campylobacter из продуктов пищевой цепи. Состав и критерии эффективности среды соответствуют спецификациям стандартов ISO 10272-1:2017, ISO 10272-2:2017 и ISO 11133:2014 /Amd. 2:2020 (Ε).

Принцип измерения и интерпретация

Среда разработана для обнаружения Campylobacter spp., которые обитают в кишечном тракте животных и могут загрязнять продукты животного происхождения.

• Пептон: обеспечивает быстрый и обильный рост как требовательных, так и нетребовательных микроорганизмов, способствует формированию типичной морфологии колоний, улучшению продукции пигмента и более четкому определению гемолитических реакций.
• Растворимый крахмал: служит источником энергии и нейтрализует токсичные метаболиты.
• Овечья кровь: позволяет определять гемолиз и обеспечивает гемовый фактор (X-фактор), необходимый для роста многих бактерий.
• Ограничения: среда не содержит V-фактора (никотинамидадениндинуклеотида), поэтому Haemophilus influenzae, требующий обоих факторов (X и V), на ней не растет.
• Особенности: из-за относительно высокого содержания углеводов бета-гемолитические стрептококки могут проявлять зеленоватую гемолитическую реакцию, которую можно ошибочно принять за альфа-гемолиз. Все колонии требуют подтверждающих тестов.

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендировать 44,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладить до 44–47 °C.
5. В асептических условиях добавить 5 % (об/об) стерильной дефибринированной крови овцы.
6. Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Работа с образцами (пищевые пробы)

1. Селективное обогащение A (для вареных и замороженных продуктов): 10 г или 10 мл пробы смешать с 90 мл бульона Болтона (M1592). Инкубировать в микроаэрофильной атмосфере при (37 $\pm$1) °C в течение 4–6 часов, затем при (41,5 $\pm$1) °C в течение 44 $\pm$4 часов.
2. Селективное обогащение B (для сырого мяса или сырого молока): 10 г или 10 мл пробы смешать с 90 мл бульона Престона (M8991). Инкубировать в микроаэрофильной атмосфере при (41,5 $\pm$1) °C в течение 24 $\pm$2 часов.
3. Посев: культуру из обогатительной среды инокулировать стерильной петлей (10 мкл) на поверхность агара mCCD (M887I). Инкубировать при (41,5 $\pm$1) °C в микроаэрофильной атмосфере в течение 44 $\pm$4 часов.
4. Селективное обогащение C (для слепков из слепой кишки или фекальных проб): прямой мазок или посев на агар mCCD петлей или стерильным тампоном. Инкубировать при (41,5 $\pm$1) °C в микроаэрофильной атмосфере в течение 44 $\pm$4 часов.
5. Отбор колоний для подтверждения: отобранные колонии с агара mCCD (M887I) пересевают на основу колумбийского кровяного агара. Инкубировать при (41,5 $\pm$1) °C в течение 24–48 часов в микроаэрофильных условиях.
6. Подтверждение: проведение биохимических и серологических тестов.

Технические характеристики

Состав (ISO Specification - Columbia Blood Agar)

Добавки после автоклавирования:

• Кровь: 50 мл
• Конечный pH (при 25 °C): 7,4 $\pm$0,2

Состав (M144I- Columbia Blood Agar Base)

Добавки после автоклавирования:

• Кровь (5 % об/об стерильная дефибринированная кровь овцы): 50 мл
• Конечный pH (при 25 °C): 7,4 $\pm$0,2

Общие параметры

Контроль качества

Внешний вид и свойства

• Вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до желтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,5 % агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность:
  • Базовая среда: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
  • После добавления 5 % крови: непрозрачный гель вишнево-красного цвета.
• Реакция: pH 7,3 $\pm$0,2 для 4,4 % водного раствора при 25 °C.
• Диапазон pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают при добавлении 5 % стерильной дефибринированной крови после инкубации при (41,5 $\pm$1) °C в течение 24–48 часов в микроаэрофильных условиях. Степень восстановления считается 100 % для роста бактерий на референсном (валидированном) кровяном агаре.

(*) — соответствующие номера WDCM.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C. Из-за гигроскопичности продукта необходимо плотно закрывать бутыль во избежание образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.

Ограничения и предостережения

1. Индивидуальные организмы могут иметь различные требования к росту и демонстрировать вариативность на данной среде.
2. Каждая партия протестирована на микроорганизмы, указанные в сертификате анализа (COA). При необходимости использования для специфических микроорганизмов, не указанных в COA, рекомендуется провести собственную валидацию.
3. Для окончательного подтверждения Campylobacter следует провести тесты на оксидазу, каталазу, гиппурат и гидролиз индоксилацетата.
4. При работе с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики и стандартные меры предосторожности. Используйте защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица.

Утилизация

Утилизация использованных или непригодных препаратов должна осуществляться путем автоклавирования и/или сжигания в соответствии с установленными лабораторными процедурами по обращению с инфекционными материалами.