Основа колумбийского кровяного агара с 1% агар-агара HiMedia M144A

Питательная среда HiMedia M144A «Основа колумбийского кровяного агара с 1% агар-агара» в виде порошка предназначена для приготовления кровяного, шоколадного, селективного и дифференциального агаров. Основа используется с кровью для выделения и культивирования требовательных бактерий, при этом приготовленная среда имеет конечный pH 7,3 ± 0,2 при 25 °C.

Назначение

Основа колумбийского кровяного агара HiMedia M144A применяется для приготовления:

• кровяного агара;
• шоколадного агара;
• селективных сред с различными комбинациями антимикробных добавок;
• дифференциальных сред;
• сред для выделения и культивирования требовательных и нетребовательных микроорганизмов.

Типы образцов:

• клинические образцы: респираторные экссудаты, образцы поражений кожи или ран, фекалии и другие;
• пищевые образцы.

Состав

Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с заданными рабочими параметрами.

Принцип действия и интерпретация

Колумбийская кровяная агаровая основа представляет собой питательную агаровую основу общего назначения, разработанную Ellner и соавторами в 1966 году. Среда дополнительно обогащается стерильной кровью.

Традиционные основы кровяного агара обычно содержали либо гидролизат казеина, обеспечивающий быстрое формирование крупных колоний, либо мясной настой, необходимый для получения определённых гемолитических реакций. Колумбийская агаровая основа объединяет оба компонента, что обеспечивает сочетание этих свойств.

Специальный пептон поддерживает быстрый и обильный рост требовательных и нетребовательных микроорганизмов. Среда также способствует формированию типичной морфологии колоний, усиленному образованию пигмента и более чётко выраженным гемолитическим реакциям.

Колумбийская агаровая основа используется для приготовления сред с кровью и селективных сред, в состав которых в качестве добавок вводят различные комбинации антимикробных веществ.

П. Филдс установил, что питательный агар с добавлением переваренной овечьей крови содержит оба фактора, необходимые для роста Haemophilus influenzae. Добавление бацитрацина превращает обогащённую колумбийскую агаровую среду в селективную среду для выделения видов Haemophilus из клинических образцов, особенно из образцов верхних дыхательных путей.

Основа колумбийского кровяного агара с 1% агар-агара используется для приготовления сред с кровью и селективных сред с различными комбинациями антимикробных добавок.

Кукурузный крахмал служит источником энергии и нейтрализует токсичные метаболиты. Овечья кровь позволяет выявлять гемолиз и обеспечивает гем, или фактор X, необходимый для роста многих бактерий. При этом овечья кровь не содержит фактор V — никотинамидадениндинуклеотид; поэтому Haemophilus influenzae, которому требуются одновременно факторы X и V, на этой среде не растёт.

Из-за относительно высокого содержания углеводов β-гемолитические стрептококки могут давать зеленоватую гемолитическую реакцию, которую можно ошибочно принять за α-гемолиз. Для всех колоний необходимо проводить подтверждающие тесты.

Колумбийская агаровая основа с добавлением стерильной сыворотки обеспечивает эффективную среду для тестирования вирулентности Corynebacterium diphtheriae. После выполнения установленной методики для C. diphtheriae линии преципитации токсин–антитоксин становятся отчётливо видимыми через 48 ч.

Многие патогены требуют углекислого газа, поэтому чашки можно инкубировать в атмосфере с содержанием приблизительно 3–10 % CO₂. Культуры Brucella высокоинфекционны и требуют осторожного обращения; инкубацию проводят в атмосфере с 5–10 % CO₂. Виды Campylobacter лучше всего выращивать при 42 °C в микроаэрофильной атмосфере. Чашки со средой, содержащей добавки для Gardnerella, инкубируют при 35 °C в течение 48 ч в атмосфере с 7 % CO₂.

Методика приготовления среды

1. Приостановите 39,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите стерильную основу до 45–50 °C перед добавлением термочувствительных компонентов.

Приготовление кровяного агара

Добавьте к стерильной охлаждённой основе 5 % об./об. стерильной дефибринированной овечьей крови.

Приготовление шоколадного агара

Добавьте к стерильной охлаждённой основе 10 % об./об. стерильной дефибринированной овечьей крови. Нагревайте среду до 80 °C в течение 10 мин при постоянном перемешивании.

Приготовление селективных сред

Среду можно сделать селективной добавлением различных антимикробных веществ к стерильной основе.

Для видов Brucella добавьте восстановленное содержимое 1 флакона селективной добавки NPBCVN (FD005) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Для видов Campylobacter добавьте к 500 мл стерильной расплавленной основы восстановленное содержимое 1 флакона одной из следующих селективных добавок:

• селективная добавка Blaser–Wang (FD006);
• селективная добавка Butzler (FD007);
• селективная добавка Skirrow (FD008);
• селективная добавка VTCA (FD090);
• селективная добавка Butzler VI (FD106).

Одновременно добавьте восстановленное содержимое 1 флакона минеральной добавки для роста (FD009).

Для видов Gardnerella добавьте восстановленное содержимое 1 флакона селективной добавки GNA (FD056) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Для кокков добавьте восстановленное содержимое 1 флакона одной из следующих селективных добавок к 500 мл стерильной расплавленной основы:

• селективная добавка NC (FD030);
• селективная добавка NNP (FD031);
• селективная добавка CO (FD119).

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Указания по безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Из-за относительно высокого содержания углеводов β-гемолитические стрептококки могут давать зеленоватую гемолитическую реакцию, которую можно ошибочно принять за α-гемолиз.
2. Потребности отдельных микроорганизмов в условиях роста различаются, поэтому характер роста на среде может быть вариабельным.
3. Каждая партия среды протестирована на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа. Для конкретного микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, пользователю рекомендуется валидировать среду с учётом индивидуальных требований.
4. Для полной идентификации необходимы дополнительные биохимические и серологические исследования.

Рабочие характеристики

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно указаниям на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,0%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: исходная среда — прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета; после добавления 5 % об./об. стерильной дефибринированной крови в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.
• Реакция: реакция 3,9%-ного масс./об. водного раствора при 25 °C.
• pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления 5 % об./об. дефибринированной крови и инкубации при 35–37 °C в течение 40–48 ч.