Основа колумбийского кровяного агара с 1% агар-агара HiMedia M144A

Основа колумбийского кровяного агара с 1% агар-агара HiMedia M144A производства HiMedia. Используется для изоляции и культивирования требовательных бактерий при добавлении крови.

Принцип измерения

Колумбийский кровяной агар представляет собой универсальную питательную среду, разработанную Эллнером и соавторами в 1966 году. В отличие от традиционных основ, которые используют либо гидролизат казеина (для быстрого роста крупных колоний), либо мясной настой (для четких гемолитических реакций), данная основа сочетает оба компонента, что обеспечивает улучшенные общие характеристики.

Специальный пептон поддерживает быстрый и обильный рост как требовательных, так и нетребовательных микроорганизмов, способствует формированию типичной морфологии колоний, усилению выработки пигмента и более четкому определению гемолитических реакций. Кукурузный крахмал служит источником энергии и нейтрализует токсичные метаболиты. Овечья кровь позволяет выявлять гемолиз и обеспечивает гем (X-фактор), необходимый для роста многих бактерий.

Область применения

Среда применяется для анализа следующих типов образцов:

• Клинические образцы: экссудаты дыхательных путей, поражения кожи или ран, фекалии и др.
• Образцы пищевых продуктов.

Методика приготовления и использования

Приготовление базовой среды

1. Растворите 39,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладите до 45–50 °C перед добавлением термолабильных компонентов.

Варианты модификации среды

• Кровяной агар: к стерильной охлажденной основе добавьте 5 % (об/об) стерильной дефибринированной крови овцы.
• Шоколадный агар: к стерильной охлажденной основе добавьте 10 % (об/об) стерильной дефибринированной крови овцы. Нагрейте при постоянном перемешивании до 80 °C в течение 10 минут.
• Селективные среды: для создания селективных сред в стерильную основу добавляются различные антимикробные агенты.

Добавки для специфических микроорганизмов (на 500 мл стерильной расплавленной основы)

• Виды Brucella: 1 ампула селективной добавки NPBCVN (FD005).
• Виды Campylobacter: 1 ампула добавки Blaser-Wang (FD006), Butzler (FD007), Skirrow (FD008), VTCA (FD090) или Butzler VI (FD106) совместно с 1 ампулой минеральной добавки для роста (FD009).
• Виды Gardnerella: 1 ампула селективной добавки GNA (FD056).
• Кокки: 1 ампула селективной добавки NC (FD030), NNP (FD031) или CO (FD119).

Условия культивирования и интерпретация

Многим патогенам требуется углекислый газ, поэтому посевы следует инкубировать в атмосфере с содержанием CO₂ примерно 3–10 %.

• Специфические режимы:
  • Campylobacter: оптимальный рост при 42 °C в микроаэрофильной атмосфере.
  • Gardnerella (с добавками): инкубация при 35 °C в течение 48 часов в атмосфере с 7 % CO₂.
  • Brucella: высокая инфекционность, осторожное обращение, инкубация в 5–10 % CO₂.
  • Corynebacterium diphtheriae: при добавлении стерильной сыворотки среда эффективна для теста на вирулентность; линии преципитации токсин-антитоксин становятся видимыми через 48 часов.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Физико-химические показатели

• Конечный pH (при 25 °C): 7,3 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,10–7,50
• Внешний вид: однородный свободнотекучий порошок от кремового до желтого цвета
• Свойства геля: плотный, сопоставим с 1,0 % агаровым гелем
• Цвет и прозрачность основы: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель
• Цвет после добавления 5 % крови: непрозрачный гель вишнево-красного цвета

Общие параметры

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при добавлении 5 % (об/об) дефибринированной крови после инкубации при 35–37 °C в течение 40–48 ч.

Ограничения применения

1. Из-за относительно высокого содержания углеводов бета-гемолитические стрептококки могут проявлять зеленоватую гемолитическую реакцию, которую можно ошибочно принять за альфа-гемолиз. Требуется проведение подтверждающих тестов всех колоний.
2. Haemophilus influenzae не растет на данной среде, так как она не содержит V-фактор (никотинамидадениндинуклеотид), несмотря на наличие X-фактора (гема).
3. Индивидуальные организмы могут демонстрировать вариативность паттернов роста.
4. Для полной идентификации требуется дополнительное биохимическое и серологическое тестирование.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение приготовленной среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Утилизация

Загрязненные материалы и использованные препараты подлежат обязательной стерилизации в автоклаве или сжиганию в соответствии с установленными лабораторными процедурами по обращению с инфекционными материалами.