Питательная среда — основа агара PLET HiMedia M1446-500G (уп/500 гр) в форме порошка для селективного выделения и культивирования Bacillus anthracis. Основа применяется для анализа клинических и экологических образцов, при этом подавляет рост большинства штаммов Bacillus cereus, других видов Bacillus, представителей семейства Enterobacteriaceae и видов Pseudomonas.

Назначение

Основа агара PLET рекомендована для селективного выделения и культивирования Bacillus anthracis. Тип образца: клинические образцы, образцы окружающей среды.

Изделие предназначено для диагностики in vitro и профессионального применения.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Эквивалент настоя из говяжьего сердца.

Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 40,34 г порошка в 990 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа; ≈1,03 бар) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки для среды PL Selective Supplement (FD185).
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Сибирская язва — инфекционное заболевание, вызываемое спорами бактерии Bacillus anthracis. При сибирской язве у человека Bacillus anthracis обычно обнаруживается в материале из злокачественной пустулы, иногда — в мокроте при лёгочной форме, а также в крови при септической стадии всех форм заболевания. Человек обладает относительной устойчивостью к сибирской язве, и лабораторные работники заражаются редко. Несмотря на это, необходимо тщательно предотвращать попадание спор, длительно сохраняющихся во внешней среде, в лабораторное помещение; все процедуры следует выполнять в защитном шкафу.

Сибирская язва не передаётся непосредственно от человека к человеку, однако споры могут переноситься одеждой и обувью человека. Заражение людей происходит при контакте с погибшими инфицированными животными, употреблении тканей инфицированных животных или воздействии спор сибирской язвы низкой плотности, содержащихся в шерсти, мехе, шкуре и других материалах животного происхождения.

Основа агара PLET, первоначально разработанная Книсли (Knisely), является селективной средой для культивирования Bacillus anthracis из предполагаемо заражённых образцов окружающей среды, продуктов животного происхождения и клинических образцов; среда подавляет рост Bacillus cereus.

Настой HM B из твёрдых компонентов и триптоза обеспечивают углеродистые и азотистые соединения, необходимые для роста. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие. Ацетат таллия и полимиксин, входящий в состав добавки FD185, являются ингибирующими агентами: они обеспечивают рост Bacillus anthracis и подавляют загрязняющую микрофлору. Лизоцим из состава FD185 специфически подавляет рост грамотрицательных загрязнителей.

Предполагаемый образец можно непосредственно использовать для нанесения штрихового посева. Также для посева допускается использовать образцы после термической или спиртовой обработки.

После инкубации при 37 °C в течение 24 ч колонии формируются у 30–100 % спор Bacillus anthracis, которые могли бы вырасти на неселективном агаре HI (M169). На агаре PLET такие колонии меньше и имеют более гладкую поверхность, чем на агаре HI.

Основа агара PLET подавляет рост большинства штаммов Bacillus cereus, Bacillus subtilis, других видов Bacillus, представителей семейства Enterobacteriaceae и видов Pseudomonas. Некоторые штаммы Bacillus cereus из почвы формируют колонии, однако через 24 ч они меньше колоний Bacillus anthracis и имеют точечный размер; через 48 ч колонии достигают среднего размера.

Колонии Bacillus anthracis появляются через 36–40 ч инкубации при 37 °C. Они имеют приблизительно круглую форму, кремово-белый цвет и текстуру, напоминающую матовое стекло. Для идентификации такие колонии дополнительно пересевают на чашки с кровяным агаром. Образование капсулы можно наблюдать непосредственно или на чашках с кровяным агаром.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие микробиологические лабораторные практики при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Руководства по безопасности могут быть приведены в соответствующих паспортах безопасности.
• Работы с образцами следует выполнять в защитном шкафу, чтобы предотвратить распространение спор Bacillus anthracis в лабораторной среде.

Ограничения

Колонии приблизительно круглой формы, кремово-белого цвета и с текстурой матового стекла необходимо дополнительно пересевать на чашки с кровяным агаром для идентификации. Образование капсулы можно наблюдать непосредственно или на чашках с кровяным агаром.

Контроль качества

Ожидаемые характеристики среды приведены для применения в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

• Внешний вид: однородный, свободно текучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 4,03 % масс./об. при 25 °C.
• pH по реакции: 7,3 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления селективной добавки для среды PL Selective Supplement (FD185) и инкубации при 35–37 °C в течение 36–40 ч.

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения сухого продукта: плотно закрытый контейнер, сухое проветриваемое помещение, защита от экстремальных температур и источников воспламенения.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты, указанной на этикетке.
• После открытия плотно закрывайте флакон и храните продукт в сухом состоянии.
• Продукт гигроскопичен; при недостаточно плотном закрытии или ненадлежащем хранении возможно образование комков.
• После каждого использования контейнер необходимо плотно закрывать.
• Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в пределах указанного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов путём автоклавирования и/или сжигания. Лабораторные процедуры утилизации инфекционных материалов необходимо соблюдать в установленном порядке. Материал, контактировавший с клиническим образцом, следует обеззаразить и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Технические характеристики

Техническое отличие от неселективных сред

В отличие от неселективного агара HI (M169), основа агара PLET содержит ингибирующие компоненты и селективную добавку FD185, подавляющие сопутствующую микрофлору и обеспечивающие селективное культивирование Bacillus anthracis.