HiMedia M144-100G Основа колумбийского кровяного агара

Основа питательной среды HiMedia M144-100G для приготовления кровяного и шоколадного агара, селективных и идентификационных сред; масса упаковки — 100 г. Применяется для выделения микроорганизмов из клинических и не клинических образцов, при этом Haemophilus influenzae без дополнительного источника V-фактора на среде не растёт.

Назначение

Основа предназначена для:

• приготовления кровяного агара;
• приготовления шоколадного агара;
• приготовления различных селективных и идентификационных питательных сред;
• выделения микроорганизмов из клинических и не клинических образцов.

Состав

Для приготовления 1 л среды используют 44,0 г сухой основы.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных рабочих характеристик.

Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 44,0 г основы в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа, ≈1,03 бар) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите стерильную основу до 45–50 °C перед добавлением термочувствительных компонентов.

Приготовление кровяного агара

Добавьте 5 % об./об. стерильной дефибринированной крови овцы к стерильной охлаждённой основе.

Приготовление шоколадного агара

Добавьте 10 % об./об. стерильной дефибринированной крови овцы к стерильной охлаждённой основе. Нагревайте смесь до 80 °C в течение 10 мин при постоянном перемешивании.

Приготовление селективных сред

Селективность среды обеспечивают добавлением различных противомикробных препаратов к стерильной основе.

• Для видов рода Brucella: добавьте регидратированное содержимое 1 флакона селективной добавки NPBCVN (FD005) к 500 мл стерильной расплавленной основы.
• Для видов рода Campylobacter: добавьте к 500 мл стерильной расплавленной основы регидратированное содержимое 1 флакона одной из селективных добавок: Blaser-Wang (FD006), Butzler (FD007), Skirrow (FD008), VTCA (FD090) или Butzler VI (FD106). Дополнительно внесите регидратированное содержимое 1 флакона минеральной ростовой добавки (FD009) и 5–7 % об./об. крови лошади или овцы.
• Для видов рода Gardnerella: добавьте регидратированное содержимое 1 флакона селективной добавки GNA (FD056) к 500 мл стерильной расплавленной основы.
• Для кокков: добавьте регидратированное содержимое 1 флакона одной из селективных добавок: NC (FD030), NNP (FD031) или CO (FD119) к 500 мл стерильной расплавленной основы.

Принцип действия и интерпретация

Колумбийская кровяная агаровая основа разработана Ellner и соавторами. Специальный пептон поддерживает быстрый и обильный рост требовательных и нетребовательных микроорганизмов. Среда способствует формированию типичной морфологии колоний, усиленному образованию пигмента и более чётко выраженным гемолитическим реакциям.

По данным Fildes, питательный агар с добавлением гидролизата крови овцы обеспечивает оба фактора, необходимые для роста микроорганизмов, и поддерживает рост H. influenzae. Добавление бацитрацина делает обогащённую колумбийскую агаровую среду селективной для выделения видов рода Haemophilus из клинических образцов, особенно из образцов верхних дыхательных путей.

Колумбийская агаровая основа используется для приготовления сред с кровью, а также селективных сред, в состав которых входят различные комбинации противомикробных добавок.

• Кукурузный крахмал служит источником энергии и нейтрализует токсичные метаболиты.
• Кровь овцы обеспечивает выявление гемолиза и поставляет гем, или X-фактор, необходимый для роста многих бактерий.
• Кровь овцы не содержит V-фактор — никотинамидадениндинуклеотид; поэтому Haemophilus influenzae, которому необходимы одновременно X- и V-факторы, на этой среде не растёт.

Колумбийская агаровая основа с добавлением стерильной сыворотки образует эффективную среду для определения вирулентности Corynebacterium diphtheriae. После выполнения установленной методики для C. diphtheriae линии преципитации токсина и антитоксина становятся отчётливо видимыми через 48 ч.

Многие патогенные микроорганизмы требуют углекислого газа; поэтому чашки можно инкубировать в атмосфере, содержащей приблизительно 3–10 % CO₂.

Тип образцов

Клинические образцы:

• мазки из зева;
• гной.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методики обращения с образцами согласно установленным лабораторным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Условия инкубации и специальные указания

• Культуры Brucella высокоинфекционны и требуют осторожного обращения; инкубируйте культуры в атмосфере с 5–10 % CO₂.
• Виды рода Campylobacter лучше всего выращивать при 42 °C в микроаэрофильной атмосфере.
• Чашки со средой, содержащей добавки для Gardnerella, следует инкубировать при 35 °C в течение 48 ч в атмосфере с 7 % CO₂.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• При необходимости обращайтесь к требованиям безопасности, приведённым в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения

1. Некоторые требовательные микроорганизмы, например Haemophilus influenzae, могут не расти на этой среде; может потребоваться добавление крови.
2. Из-за относительно высокого содержания углеводов β-гемолитические стрептококки могут давать зеленоватую гемолитическую реакцию, которую можно ошибочно принять за α-гемолиз.
3. Для полной идентификации колоний чистой культуры требуется биохимическая характеристика.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Базовая среда: прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.
• После добавления 5 % масс./об. стерильной дефибринированной крови: в чашках Петри образуется непрозрачный гель вишнёво-красного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 4,4 % масс./об. при 25 °C.

pH: 7,3 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,10–7,50.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления 5 % масс./об. стерильной дефибринированной крови и инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.