Питательная среда Основа бульона для выделения урогенитальных микоплазм HiMedia M1374-500G (уп/500 гр) — диагностическая основа для селективного культивирования Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum. Основа применяется при исследовании клинических образцов и требует асептического приготовления с добавлением ростовых, селективных компонентов и сыворотки лошади.

Назначение и область применения

Среда рекомендована для селективного культивирования Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum из клинических образцов.

Тип питательной среды: диагностический.
Назначение изделия: основа.
Сертификат: ФСЗ 2009/03709.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Порошок HI эквивалентен порошку сердечного настоя.

Принцип действия и интерпретация результатов

Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum связаны с урогенитальными инфекциями у мужчин и женщин. Размер этих микроорганизмов значительно меньше размера большинства бактерий и составляет 0,2–0,3 мкм, поэтому они способны проходить через бактериологические фильтры.

В отличие от других бактерий, микоплазмы не имеют жёсткой клеточной стенки. Отдельные клетки ограничены только трёхслойной единичной мембраной. Поэтому для культивирования Mycoplasma и Ureaplasma требуется обогащённая среда, содержащая предшественники биосинтеза нуклеиновых кислот, белков и липидов.

Предшественники нуклеиновых кислот и белков преимущественно обеспечиваются обогащённой пептонной основой и дрожжевым экстрактом, а липиды поступают за счёт добавления сыворотки. Одним из основных критериев таксономической классификации этих микроорганизмов является потребность некоторых Mycoplasma и микоплазмоподобных организмов в сложном липиде холестерине, содержащемся в питательной среде.

Основа бульона для урогенитальных микоплазм изготовлена на базе формулы, применяемой для селективного культивирования урогенитальных микоплазм, включая M. hominis и U. urealyticum, из клинических образцов.

Триптон и порошок HI обеспечивают необходимые питательные вещества для роста Mycoplasma и Ureaplasma. Дрожжевой экстракт содержит готовые предшественники нуклеиновых кислот, необходимые для роста требовательных микоплазм. Для полноценного роста многих микоплазм требуется сыворотка. Антибиотики, присутствующие в селективной добавке PAN FD175, необходимы для подавления сопутствующей микробной флоры.

Функциональное назначение компонентов:

• хлорид натрия поддерживает осмотический баланс;
• феноловый красный используется как индикатор pH;
• M. hominis метаболизирует аргинин до аммиака через орнитин с участием системы из трёх ферментов, что приводит к повышению pH среды и изменению окраски на красную;
• Ureaplasma содержит фермент уреазу и расщепляет мочевину до аммиака, что сопровождается изменением окраски на красно-оранжевую.

Для дифференциации M. hominis и U. urealyticum требуются дополнительные тесты.

U. urealyticum обычно вызывает изменение окраски бульона в течение 24 ч; при низком титре изменение окраски наблюдается в течение 48 ч. M. hominis обычно вызывает изменение окраски в течение 48 ч, а при высоком титре — в течение 24 ч.

Отрицательный бульон должен оставаться прозрачным или может иметь лёгкую опалесценцию. Высокая мутность бульона указывает на наличие контаминирующих микроорганизмов.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 14,33 г порошка в 425 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое:
   • 1 флакона витаминной ростовой добавки Vitamino Growth Supplement FD025;
   • 1 флакона добавки U5 Supplement FD157;
   • 50 мл сыворотки лошади Horse Serum RM1239;
   • 1 флакона селективной добавки PAN Selective Supplement FD175.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в пробирки или колбы в необходимом объёме.

Тип образцов

Клинические образцы:

• мазки из носоглотки;
• мазки из ротоглотки.

Отбор и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными лабораторными процедурами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры безопасности

• Только для применения in vitro.
• Только для профессионального использования.
• Перед открыванием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила микробиологической работы при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными процедурами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Виды Mycoplasma являются аэробными или факультативно анаэробными, однако некоторые виды относятся к микроаэрофильным; для оптимального выделения необходимо обеспечить соответствующие условия инкубации.
2. Высокая мутность бульона указывает на наличие контаминирующих микроорганизмов.

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или розовый однородный легко сыпучий порошок.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Прозрачный раствор красновато-розового цвета в пробирках.

Реакция среды

Реакция 2,86 % мас./об. водного раствора при 25 °C: pH 6,3 ± 0,2.

pH

6,10–6,50.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 48 ч — 1 недели с добавлением витаминной ростовой добавки FD025, добавки U5 FD157, сыворотки лошади RM1239 и добавки PAN FD175.

Технические характеристики

Хранение и срок годности