Питательная среда EC 0157 агар с МУГ HiMedia M1373-500G (уп/500 гр) с конечным pH 7,4 ± 0,2. Предназначена для выделения и дифференциации энтерогеморрагической Escherichia coli O157:H7 из пищевых продуктов, воды и других образцов флуорогенным методом с использованием сорбитола и β-D-глюкуронидазы.

Назначение

Среда предназначена для выделения и количественного определения энтерогеморрагической Escherichia coli (EHEC) из пищевых продуктов, воды и клинических образцов по утилизации сорбитола и образованию фермента β-глюкуронидазы.

Типы исследуемых образцов:

• клинический материал;
• пищевые продукты и молочные продукты;
• пробы воды.

Состав

Состав, г/л:

Эквивалент казеинового пептона.

$ Эквивалент мясного экстракта.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами рабочих характеристик.

Конечный pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 54,74 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешайте и разлейте в стерильные чашки Петри.

Принцип измерения и интерпретация

Дезоксихолат натрия подавляет рост грамположительных микроорганизмов. Сорбитол служит источником углерода и энергии, а бромтимоловый синий — индикатором pH.

Микроорганизмы, утилизирующие сорбитол, образуют жёлтые колонии. Сорбитол-отрицательные штаммы, включая Escherichia coli O157:H7, растут в виде бесцветных или зеленоватых колоний.

Образование сероводорода выявляется по чёрно-коричневому окрашиванию колоний в присутствии тиосульфата натрия и цитрата аммонийного железа. Благодаря этому Proteus mirabilis, обладающий сходными с Escherichia coli O157:H7 биохимическими характеристиками, может быть дифференцирован по окрашиванию колоний.

4-метилумбеллиферил β-D-глюкуронид (МУГ) преобразуется патогенами, образующими β-D-глюкуронидазу, в 4-метилумбеллиферон. 4-метилумбеллиферон флуоресцирует под ультрафиолетовым излучением.

Все комменсальные штаммы Escherichia coli образуют β-глюкуронидазу. Escherichia coli O157:H7 не способна образовывать β-глюкуронидазу, поэтому при воздействии длинноволнового ультрафиолетового излучения флуоресценция не наблюдается. Для усиления флуоресценции чашки обрабатывают парами аммиака; также флуоресценцию можно визуализировать после добавления раствора NaOH.

Энтерогеморрагические штаммы Escherichia coli O157:H7 продуцируют токсины, способные вызывать опасные для жизни внекишечные осложнения, включая гемолитико-уремический синдром и тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру. Поэтому выделение и обнаружение штаммов Escherichia coli O157:H7 имеет клиническое значение.

Подготовка, сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с пробами в соответствии с установленными руководствами.

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб в соответствии с руководствами.

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов в соответствии с руководствами и местными нормативными требованиями.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,3%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель голубовато-зелёного цвета.

Реакция

Реакция 5,47%-ного водного раствора при 25 °C: pH 7,4 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

# Флуоресценцию можно визуализировать после добавления раствора NaOH или воздействия паров аммиака.

(#) Ранее организм назывался Enterobacter aerogenes.

Технические характеристики

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Ёмкость с сухой средой должна быть плотно закрыта.
• После вскрытия храните продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Храните продукт в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников восп