Диагностическая среда EC 0157 агар с МУГ HiMedia M1373-500G (производство: HiMedia) предназначена для изоляции и дифференциации энтерогеморрагических штаммов Escherichia coli O157:H7. Среда применяется для анализа пищевых продуктов, воды и клинических образцов с использованием флуорогенного метода определения.

Принцип измерения и интерпретация

MUG EC O157 Agar используется для выделения и подсчета энтерогеморрагических Escherichia coli (EHEC) на основе способности микроорганизмов утилизировать сорбитол и вырабатывать фермент бета-глюкуронидазу.

Механизмы дифференциации:

• Ингибирование: дезоксихолат натрия подавляет рост грамположительных микроорганизмов.
• Утилизация сорбитола: сорбитол служит источником углерода и энергии. Бромтимоловый синий выступает в роли pH-индикатора. Микроорганизмы, утилизирующие сорбитол, образуют жёлтые колонии; сорбитол-отрицательные штаммы (включая E. coli O157:H7) образуют зеленоватые колонии.
• Продукция H₂S: наличие тиосульфата натрия и цитрата аммония-железа(III) позволяет обнаружить образование сероводорода по появлению чёрно-коричневого окрашивания колоний. Это позволяет дифференцировать Proteus mirabilis, имеющую схожие биохимические характеристики с E. coli O157:H7.
• Флуорогенный тест (MUG): 4-метилумбеллиферил-β-D-глюкуронид (MUG) превращается в 4-метилумбеллиферон под действием бета-D-глюкуронидазы. 4-метилумбеллиферон флуоресцирует под воздействием УФ-света. Все комменсальные E. coli вырабатывают бета-глюкуронидазу, в то время как E. coli O157:H7 не способны к её синтезу. Таким образом, при облучении длинноволновым УФ-светом флуоресценция для штаммов O157:H7 не наблюдается. Для усиления флуоресценции plates могут быть подвергнуты воздействию паров аммиака.

Состав

Состав, г/л:

Конечный pH (при 25 °C): 7,4 ± 0,2.

Методика приготовления и использования

Приготовление среды

1. Суспендировать 54,74 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$ 0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C.
5. Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Работа с образцами

• Клинические образцы: сбор и обработка согласно установленным руководствам.
• Пищевые и молочные продукты: сбор и обработка согласно отраслевым стандартам.
• Пробы воды: сбор и обработка согласно местным стандартам и руководствам.
• Утилизация: после использования контаминированные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве перед утилизацией.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Флуоресценция может быть визуализирована при добавлении раствора NaOH или воздействии паров аммиака.

Технические характеристики

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,3 % агаром.
• Цвет и прозрачность: в чашках Петри образуется голубовато-зелёный прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
• Реакция: pH 5,47 % (масса/объём) водного раствора при 25 °C составляет 7,4 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,20–7,60.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников возгорания.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон необходимо плотно закрыть во избежание образования комков.

Ограничения и меры предосторожности

• Ограничения: для окончательной идентификации штаммов необходимо проведение дополнительных биохимических и серологических тестов.
• Меры безопасности: только для профессионального использования (In Vitro диагностика). При работе использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица. Соблюдать правила микробиологической безопасности при работе с клиническими образцами.