Основа агара М-СР для клостридий HiMedia M1354-500G (уп/500 гр)

Питательная среда — основа агара М-СР для клостридий HiMedia M1354-500G (уп/500 гр) с конечным pH 7,6 ± 0,2. Основа предназначена для выделения и количественного определения Clostridium perfringens в пробах воды и пищевых продуктах методом мембранной фильтрации после добавления селективных добавок.

Назначение

Основа агара М-СР применяется для выделения и количественного определения Clostridium perfringens из проб воды методом мембранной фильтрации; также допускается анализ пищевых образцов. Формула среды подготовлена по составу Armon и Payment; применение для анализа проб воды рекомендовано Директивой Совета Европейского союза 98/83/EC.

В исходной карточке указаны регистрационные данные: ФСЗ 2009/03709; соответствие ГОСТ Р 54354-2011.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных показателей эффективности среды.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Модель/артикул: M1354-500G
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Форма выпуска: порошок
• Происхождение компонентов: животное
• Тип продукта: стандартный
• Материал упаковки: ПНД (HDPE, полиэтилен высокой плотности)
• Масса упаковки: 500 г
• Конечный pH при 25 °C: 7,6 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,40–7,80
• Концентрация водного раствора для контроля реакции: 7,12 % масс./об.
• Условия хранения сухого продукта: 15–25 °C, плотно закрытая упаковка
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до светло-зелёного цвета
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный или слегка опалесцирующий гель фиолетового цвета

Принцип действия и интерпретация результатов

Клостридии относятся к основным причинам пищевых отравлений и заболеваний желудочно-кишечного тракта. Это грамположительные спорообразующие палочки, естественно присутствующие в почве. К представителям семейства относятся Clostridium botulinum, продуцирующий один из наиболее сильнодействующих известных токсинов, Clostridium tetani, вызывающий столбняк, и Clostridium perfringens, который часто обнаруживается при раневых инфекциях и диарее.

Многие бактериальные патогены используют токсины для повреждения организма-хозяина. Основным фактором вирулентности C. perfringens является энтеротоксин CPE, секретируемый при проникновении бактерии в кишечник; энтеротоксин участвует в развитии пищевых отравлений и других желудочно-кишечных заболеваний.

Для количественного определения C. perfringens разработаны различные плотные питательные среды. Селективность таких сред обеспечивается включением одного или нескольких антибиотиков, подавляющих определённые анаэробные или факультативно-анаэробные микроорганизмы.

Триптоза и дрожжевой экстракт обеспечивают среду азотистыми и углеродистыми соединениями, аминокислотами с длинной цепью, витаминами, минеральными веществами и другими факторами роста. Сахароза служит ферментируемым углеводом. Бромкрезоловый пурпурный используется как индикатор pH. Индоксил-β-D-глюкозид является хромогенным субстратом для β-D-глюкозидазы, или целлобиазы. Фенолфталеиндифосфат используется для выявления кислой фосфатазы.

Добавление D-циклосерина и полимиксина B в составе селективной добавки M-CP Selective Supplement I (FD153) подавляет сопутствующую неклостридиальную микрофлору и позволяет анализировать вегетативные клетки и споры клостридий. Дополнительная селективность обеспечивается инкубацией в анаэробных условиях.

Жёлтые колонии, отрицательные по целлобиазе и приобретающие старо-розовую или розово-красную окраску после воздействия паров аммиака в течение 30 с, рассматриваются как предположительно принадлежащие C. perfringens. Цветовая дифференциация на основе агара М-СР иногда затруднена, поэтому для подтверждения отбирают как типичные колонии — жёлтые, меняющие цвет на розовый, — так и атипичные колонии зелёного цвета или сохраняющие жёлтую окраску после воздействия паров аммиака.

Предположительное наличие C. perfringens подтверждают следующими признаками и биохимическими тестами:

• восстановление сульфита;
• грамположительная окраска;
• спорообразование;
• форма палочек;
• неподвижность;
• восстановление нитрата;
• разжижение желатина;
• ферментация лактозы;
• другие биохимические тесты.

Приготовление среды

1. Приготовьте суспензию 35,60 г сухой среды в 485 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (ориентировочно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки M-CP Selective Supplement I (FD153) и одного флакона M-CP Selective Supplement II (FD154) либо регидратированное содержимое одного флакона модифицированной селективной добавки M-CP Selective Supplement II (FD154A).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Типы образцов

• Пробы воды.
• Пищевые образцы.

Отбор и обращение с образцами

Для проб воды применяйте подходящие методы отбора и обработки образцов в соответствии с руководствами и местными нормативными требованиями.

Для пищевых образцов применяйте подходящие методы отбора и обработки в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Производительность, специфичность и селективность

Культуральные характеристики для оценки производительности наблюдали после инкубации в анаэробной атмосфере при 44 ± 1 °C в течение 21 ± 3 ч с добавлением стерильных селективных добавок M-CP Selective Supplement I (FD153) и M-CP Selective Supplement II (FD154) либо модифицированной добавки M-CP Selective Supplement II (FD154A). Коэффициент восстановления принимают за 100 % при росте бактерий на референсной среде — соево-казеиновом агаре (соево-триптонном агаре).

Культуральные характеристики для оценки специфичности наблюдали после инкубации в анаэробной атмосфере при 44 ± 1 °C в течение 21 ± 3 ч с добавлением стерильных селективных добавок M-CP Selective Supplement I (FD153) и M-CP Selective Supplement II (FD154) либо модифицированной добавки M-CP Selective Supplement II (FD154A).

Культуральные характеристики для оценки селективности наблюдали после инкубации в анаэробной атмосфере при 44 ± 1 °C в течение 21 ± 3 ч с добавлением стерильных селективных добавок M-CP Selective Supplement I (FD153) и M-CP Selective Supplement II (FD154) либо модифицированной добавки M-CP Selective Supplement II (FD154A).