HiMedia M1354-100G Основа M-CP агара

Основа питательной среды HiMedia M1354-100G Основа M-CP агара — сухой порошковый агар для приготовления 485 мл среды, содержащий 35,60 г обезвоженной основы. Среда предназначена для выделения и количественного определения Clostridium perfringens в пробах воды методом мембранной фильтрации, а также для анализа пищевых образцов; некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост, а цветовая дифференциация колоний иногда затруднена.

Назначение

Основа M-CP агара предназначена для выделения и количественного определения Clostridium perfringens из проб воды методом мембранной фильтрации. Среда также применяется для исследования пищевых образцов.

Методика рекомендована Директивой Совета Европейского союза 98/83/EC для выделения и количественного определения Clostridium perfringens из проб воды.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам эффективности.

Конечный pH при 25 °C: 7,6 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация результатов

Клостридии — грамположительные спорообразующие палочки, естественно встречающиеся в почве и являющиеся одной из основных причин пищевых отравлений и желудочно-кишечных заболеваний. К этому семейству относятся Clostridium botulinum, продуцирующий один из наиболее сильнодействующих известных токсинов, Clostridium tetani, вызывающий столбняк, и Clostridium perfringens, который часто обнаруживается при раневых инфекциях и диарейных заболеваниях.

Основным фактором вирулентности C. perfringens является энтеротоксин CPE, секретируемый при инвазии кишечника хозяина и участвующий в развитии пищевых отравлений и других желудочно-кишечных заболеваний. Для количественного определения C. perfringens разработано несколько плотных питательных сред. Селективность таких сред обеспечивается добавлением одного или нескольких антибиотиков, подавляющих рост определённых анаэробных или факультативно-анаэробных микроорганизмов.

Основа M-CP агара приготовлена по формуле Armon и Payment и предназначена для выделения и количественного определения Clostridium perfringens из проб воды методом мембранной фильтрации.

Триптоза и дрожжевой экстракт обеспечивают азотистые и углеродистые соединения, аминокислоты с длинной цепью, витамины, минеральные вещества и другие необходимые факторы роста. Сахароза является ферментируемым углеводом. Бромкрезоловый пурпурный используется как индикатор pH. Индоксил-β-D-глюкозид служит хромогенным субстратом для β-D-глюкозидазы, или целлобиазы, а дифосфат фенолфталеина — субстратом для выявления кислой фосфатазы.

Добавление D-циклосерина и полимиксина B в составе селективной добавки M-CP I (FD153) подавляет сопутствующую неклостридиальную микрофлору и позволяет анализировать вегетативные клетки и споры клостридий. Дополнительная селективность обеспечивается инкубацией в анаэробных условиях.

Жёлтые колонии, не обладающие целлобиазой, которые после воздействия паров аммиака в течение 30 с приобретают окраску от старо-розовой до розово-красной, считают предположительно положительными на C. perfringens. Цветовая дифференциация на основе M-CP агара иногда затруднена, поэтому для подтверждения отбирают как типичные колонии — жёлтые, меняющие окраску на розовую, — так и атипичные колонии: зелёные или сохраняющие жёлтую окраску после воздействия паров аммиака.

Предположительное наличие C. perfringens подтверждают следующими признаками и биохимическими тестами:

• восстановление сульфита;
• грамположительные спорообразующие палочки;
• неподвижность;
• восстановление нитрата;
• разжижение желатина;
• ферментация лактозы;
• другие биохимические тесты.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 35,60 г сухой среды, что соответствует количеству обезвоженной среды для 485 мл, в 485 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (ориентировочно ≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте регидратированное содержимое одного флакона селективной добавки M-CP I (FD153) и одного флакона селективной добавки M-CP II (FD154) либо регидратированное содержимое одного флакона модифицированной селективной добавки M-CP II (FD154A).
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Тип образцов

• Пробы воды.
• Пищевые образцы.

Отбор и обращение с образцами

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов согласно руководствам и местным нормативным требованиям.

Для пищевых образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы перед утилизацией необходимо стерилизовать автоклавированием.

Контроль качества

Внешний вид и свойства

• Внешний вид: однородный, сыпучий порошок от светло-жёлтого до светло-зелёного цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель фиолетового цвета.
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 7,12 % масс./об. при 25 °C.
• pH: 7,40–7,80.
• Реакция водного раствора: pH 7,6 ± 0,2 при 25 °C.

Культуральные характеристики

Продуктивность оценивали после инкубации в анаэробной атмосфере при 44 ± 1 °C в течение 21 ± 3 ч с добавлением стерильных селективных добавок M-CP I (FD153) и M-CP II (FD154) либо модифицированной селективной добавки M-CP II (FD154A). Коэффициент восстановления принимали равным 100 % от роста бактерий на референсной среде — агаре для переваривания соево-казеинового субстрата (соево-триптонном агаре).

Специфичность оценивали после инкубации в анаэробной атмосфере при 44 ± 1 °C в течение 21 ± 3 ч с добавлением стерильных селективных добавок M-CP I (FD153) и M-CP II (FD154) либо модифицированной селективной добавки M-CP II (FD154A).

Селективность оценивали после инкубации в анаэробной атмосфере при 44 ± 1 °C в течение 21 ± 3 ч с добавлением стерильных селективных добавок M-CP I (FD153) и M-CP II (FD154) либо модифицированной селективной добавки M-CP II (FD154A).