Основа ХайХром селективного агара ECC для обнаружения и подсчета E.coli и колиформных бактерий HiMedia M1294-500G (уп/500 гр)

Диагностическая основа ХайХром селективного агара ECC для обнаружения и подсчета E. coli и колиформных бактерий HiMedia M1294-500G. Применяется для анализа проб воды и пищевых продуктов; содержит хромогенную смесь для одновременной идентификации целевых микроорганизмов.

Принцип измерения и интерпретация

HiCrome® ECC Selective Agar представляет собой селективную среду, предназначенную для одновременного обнаружения Escherichia coli и общих колиформ в пробах воды и пищевых продуктах.

В состав хромогенной смеси входят два субстрата:

1. Фермент $\beta$-D-галактозидаза, вырабатываемый колиформами, расщепляет один из хромогенов, в результате чего образуются колонии лососевого или красного цвета.
2. Фермент $\beta$-D-глюкуронидаза, вырабатываемый E. coli, расщепляет второй хромоген (X-глюкуронид).

Колонии E. coli приобретают темно-синий или фиолетовый цвет благодаря расщеплению обоих хромогенов. Добавление L-триптофана улучшает индольную реакцию, что повышает надежность обнаружения. Специальный пептон, пируват натрия и сорбитол обеспечивают азотистые вещества, ферментируемые углеводы и другие необходимые питательные вещества. Фосфаты служат буферным агентом. Состав среды способствует восстановлению и быстрому росту даже сублетально поврежденных колиформ. Тергитол подавляет рост грамположительных, а также некоторых грамотрицательных бактерий, не относящихся к колиформам.

Для подтверждения E. coli на темно-синюю или фиолетовую колонию наносят каплю реактива Ковакса: появление вишнево-красного окрашивания свидетельствует о положительной реакции.

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендировать 26,48 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx 0,1$ МПа / 15 psi) в течение 15 минут.
4. При необходимости приготовления селективной среды: после охлаждения стерильного раствора до 45–50 °C асептически добавить содержимое 1 флакона селективной добавки ECC (FD190).
5. Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри. Примечание: возможная опалесценция (мутность) среды не влияет на её функциональные свойства.

Посев и инкубация

Инокуляция образца может быть выполнена следующими методами:

• Метод посева в глубокий слой агара (pour plate technique).
• Метод посева на поверхность агара (spreading).
• Метод мембранной фильтрации.

Инкубация проводится при температуре 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Физико-химические параметры

• Конечный pH (при 25 °C): 6,8 $\pm$ 0,2
• pH водного раствора 2,65 % (в/в) при 25 °C: 7,4 $\pm$ 0,2
• Диапазон pH: 6,60–7,00
• Внешний вид: светло-желтый или розовый гомогенный свободнотекущий порошок
• Желирование: плотный гель, сопоставим с 1,0 % агаром
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-розовый прозрачный или слегка опалесцирующий гель

Дополнительные спецификации

• Происхождение компонентов: животное
• Тип продукта: HiCrome™
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: ПНД (HDPE)
• Сертификат: ФСЗ 2009/03705

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Область применения и ограничения

Типы образцов

• Пищевые продукты.
• Пробы воды.

Ограничения

• $\beta$-глюкуронидаза присутствует у 97 % штаммов E. coli, однако отдельные штаммы могут быть отрицательными по данному признаку.
• Некоторые виды могут демонстрировать слабый рост из-за вариаций в трофических потребностях.
• Для окончательного подтверждения результатов необходимы дополнительные биохимические и серологические тесты.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 15–25 °C.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты, а также загрязненные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации в соответствии с установленными лабораторными процедурами по обращению с инфекционными материалами.