Порошковая питательная среда HiMedia M1241F-500G «Основа CPC агара с 1% целлобиозы» производства HiMedia для культивирования и идентификации видов Vibrio из пищевых продуктов; масса упаковки — 500 г. Основа применяется с модифицированной CPC-добавкой или добавкой колистина, при этом некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост из-за различий в пищевых потребностях.

Назначение

Основа CPC-агара с 1% целлобиозы предназначена для культивирования и идентификации видов Vibrio в пищевых продуктах в соответствии с Бактериологическим аналитическим руководством FDA, редакция 1998 года (FDA BAM, 1998).

Тип образца: пищевые продукты.

Состав

Состав на 1 л среды:

Пептон HM B эквивалентен мясному экстракту.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Конечный pH при 25 °C: 7,6 ± 0,2.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: M1241F-500G
• Назначение изделия: основа питательной среды
• Физическая форма: порошок
• Масса: 500 г
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)
• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Конечный pH при 25 °C: 7,6 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,40–7,80

Принцип действия и интерпретация результатов

Виды Vibrio являются естественными обитателями солоноватой и морской воды. Заболевания человека связаны с употреблением загрязнённой воды или заражённых морепродуктов. Раневые и системные инфекции могут развиваться после контакта с загрязнённой водой.

Основа CPC-агара с 1% целлобиозы содержит целлобиозу, полимиксин и колистин и разработана в соответствии с FDA BAM для дифференциации Vibrio vulnificus от других видов Vibrio. Штаммы Vibrio cholerae, за исключением классического биотипа Vibrio cholerae O1, растут на CPC-агаре, тогда как большинство штаммов Vibrio parahaemolyticus на CPC-агаре не растёт.

При наличии роста колонии приобретают зелёно-фиолетовую окраску вследствие отсутствия ферментации целлобиозы. В состав среды входят пептон HM B и пептон, поставляющие растущим видам Vibrio необходимые азотистые соединения.

Некоторые виды Vibrio ферментируют целлобиозу с образованием кислоты. Кислая реакция выявляется индикатором pH бромтимоловым синим, который при снижении pH становится жёлтым. Крезоловый красный является индикатором щелочного диапазона pH и при щелочной реакции становится красным. Щелочная реакция среды способствует восстановлению видов Vibrio.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 60,08 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм² (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте регидратированное содержимое одного флакона модифицированной CPC-добавки (FD110) или добавки колистина (FD298).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Модифицированная CPC-добавка FD110 используется для приготовления модифицированного CPC-агара, а добавка колистина FD298 — для приготовления CC-агара.

Методика анализа пищевых образцов

1. Смешайте приблизительно 25 г образца пищевого продукта с 225 мл щелочной пептонной воды.
2. Инкубируйте смесь при 35 ± 2 °C в течение 6–8 ч или до ночи — в зависимости от типа образца.
3. Перенесите петлёй культуру на поверхность высушенных чашек с основой CPC-агара с 1% целлобиозы (M1241F), содержащей модифицированную CPC-добавку FD110 для модифицированного CPC-агара либо добавку колистина FD298 для CC-агара.
4. Инкубируйте чашки при 39–40 °C в течение 18–24 ч.
5. Оцените характерные колонии Vibrio cholerae: небольшие, гладкие, непрозрачные, зелёного или фиолетового цвета. Окраска обусловлена наличием в среде двух индикаторов pH — бромтимолового синего и крезолового красного.
6. При длительной инкубации фон среды также может стать фиолетовым.
7. Для подтверждения принадлежности выделенных организмов выполните биохимические тесты.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 39–40 °C в течение 18–24 ч с добавлением модифицированной CPC-добавки FD110 или добавки колистина FD298.

Контроль качества

Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от светло-жёлтого до светло-коричневого цвета.

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется гель оливково-зелёного или светло-коричневого цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий.

Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 6,01 % масс./об. при 25 °C.

pH: 7,40–7,80.

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Сбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

Из-за различий в питательных потребностях некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост на этой среде.

Хранение и срок годности

Храните сухой продукт при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.

Приготовленную среду храните при температуре 2–8 °C.

Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде. Порошок обладает гигроскопичностью; попадание влаги может привести к образованию комков. Неправильное хранение также может вызвать комкование.

Храните продукт в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После каждого использования плотно закрывайте контейнер. Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в течение указанного срока годности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов соблюдайте установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, необходимо обеззараживать и утилизировать в соответствии с действующими лабораторными методами.