Питательная среда HiMedia M1241F-100G Основа CPC агара с 1% целлобиозы предназначена для культивирования и идентификации видов Vibrio в пищевых образцах. Основа используется с модифицированной CPC-добавкой или колистиновой добавкой при инкубации 39–40 °C в течение 18–24 ч, при этом некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост.

Назначение

CPC Agar Base с 1 % целлобиозы применяется для культивирования и идентификации видов Vibrio в пищевых продуктах в соответствии с Bacteriological Analytical Manual FDA, 1998.

Тип образца: пищевые образцы.

CPC — агаровая основа с целлобиозой, полимиксином и колистином. Для приготовления модифицированной CPC-среды используется модифицированная CPC-добавка FD110F, для CC-агара — колистиновая добавка FD298.

Состав

Состав, г/л:

Пептон HM B эквивалентен мясному экстракту.

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам рабочих характеристик.

Конечный pH при 25 °C: 7,6 ± 0,2.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 60,08 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм, что соответствует примерно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона модифицированной CPC-добавки FD110F или колистиновой добавки FD298.
6. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Виды Vibrio являются естественными обитателями солоноватой и морской воды. Заболевания человека связаны с употреблением загрязнённой воды или загрязнённых морепродуктов. Контакт с загрязнённой водой может приводить к развитию раневых и системных инфекций.

CPC-агаровая основа с 1 % целлобиозы разработана в соответствии с Bacteriological Analytical Manual FDA для дифференциации Vibrio vulnificus от других видов Vibrio. Штаммы Vibrio cholerae, за исключением Vibrio cholerae O1 классического биотипа, растут на CPC-агаре, тогда как большинство штаммов Vibrio parahaemolyticus на CPC-агаре не растут.

При наличии роста колонии приобретают зелёно-фиолетовую окраску вследствие отсутствия ферментации целлобиозы. Пептон HM B и пептон в составе CPC-агара обеспечивают растущие виды Vibrio необходимыми азотсодержащими соединениями.

Некоторые виды Vibrio ферментируют целлобиозу с образованием кислоты. Кислая реакция выявляется индикатором pH бромтимоловым синим, который при кислом pH становится жёлтым. Крезоловый красный является индикатором щелочного диапазона pH и окрашивается в красный цвет при щелочной реакции. Щелочной pH среды повышает выделение Vibrio.

Пробоподготовка и проведение анализа

1. Для пищевых образцов приблизительно 25 г пробы смешайте с 225 мл щелочной пептонной воды.
2. Инкубируйте смесь при 35 ± 2 °C в течение 6–8 ч или до ночи; продолжительность зависит от типа образца.
3. Перенесите петлёй культуру на поверхность высушенных чашек с CPC-агаровой основой с 1 % целлобиозы M1241F:
   • с модифицированной CPC-добавкой FD110F — для получения модифицированного CPC-агара;
   • с колистиновой добавкой FD298 — для получения CC-агара.
4. Инкубируйте чашки при 39–40 °C в течение 18–24 ч.
5. Типичные колонии V. cholerae имеют небольшой размер, гладкую непрозрачную поверхность и зелёную или фиолетовую окраску. Окраска обусловлена наличием двух индикаторов pH — бромтимолового синего и крезолового красного.
6. При увеличении времени инкубации фон среды также приобретает фиолетовую окраску.
7. Для подтверждения принадлежности выделенных микроорганизмов выполняют биохимические тесты.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления модифицированной CPC-добавки FD110F или колистиновой добавки FD298 и инкубации при 39–40 °C в течение 18–24 ч.

Технические характеристики

• Наименование: CPC Agar Base с 1 % целлобиозы
• Артикул производителя: M1241F
• Назначение: основа питательной среды
• Физическая форма: порошок
• Масса: 100 г
• Тип продукта: стандартный
• Происхождение: животное
• Тип упаковки: ПЭВП (HDPE)
• Конечный pH при 25 °C: 7,6 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,40–7,80
• Температура хранения сухого препарата: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до светло-коричневого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется гель оливково-зелёного или светло-коричневого цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий.

Реакция среды

Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 6,01 % масс./об. при 25 °C.

pH: 7,6 ± 0,2.

Сбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Условия хранения и срок годности

Хранение: при 10–30 °C в плотно закрытой упаковке.

Приготовленная среда: хранить при 2–8 °C.

Использование: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

После вскрытия флакон необходимо хранить в сухом виде, плотно закрывая крышку, чтобы предотвратить образование комков вследствие гигроскопичности препарата. Неправильное хранение может привести к образованию комков.

Условия хранения: сухое вентилируемое помещение, защищённое от экстремальных температур и источников воспламенения.

После каждого использования контейнер необходимо плотно закрывать.

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в течение указанного срока годности и соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Ограничения применения

Из-за вариаций питательных потребностей некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост на этой среде.

Меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• Используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При работе с образцами и культурами соблюдайте надлежащие правила микробиологической лабораторной практики.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности могут быть приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Пользователь обязан обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов следуйте установленным лабораторным процедурам. Материалы, контактировавшие с клиническим образцом, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Сравнительное техническое отличие

В отличие от стандартных сред для общего культивирования, CPC-агаровая основа с 1 % целлобиозы содержит целлобиозу, бромтимоловый синий, крезоловый красный и высокую концентрацию хлорида натрия для дифференциации видов Vibrio по росту и окраске колоний.

Ссылочная методика

Методика применения опирается на Bacteriological Analytical Manual, 8-е издание, редакция A, 1998 г.; библиографические перечни производителя не приводятся.