Основа модифицированной среды АЕА для стимуляции спорообразования HiMedia M1236-500G (уп/500 гр)

Сухая питательная среда Основа модифицированной среды АЕА для стимуляции спорообразования HiMedia M1236-500G (уп/500 гр). Применяется для раннего получения спор Clostridium perfringens из пищевых продуктов; сертификат ФСЗ 2009/03706.

Принцип измерения

Среда предназначена для индукции спорообразования у Clostridium perfringens, что необходимо для определения энтеротоксигенности штаммов, выделенных из пищевых продуктов или фекалий. Модифицированная среда AEA является адаптацией метода Taniguti и рекомендована APHA.

Биопептон и дрожжевой экстракт обеспечивают бактерии необходимыми питательными веществами. Дигидрофосфат натрия служит буферным агентом. Ацетат аммония, хлорид кобальта, карбонат натрия и сульфат магния являются источниками ионов, необходимых для процесса спорообразования. Раффиноза выступает в роли ферментируемого углевода; C. perfringens ферментирует раффинозу с образованием кислоты.

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Растворить 26,31 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. При необходимости нагреть до полного растворения.
2. Разлить среду по 15 мл в пробирки с завинчивающимися крышками.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C.
5. По каплям добавить в каждую пробирку (15 мл основы):
   • 0,6 мл стерилизованного через фильтр 10 % раствора раффинозы;
   • 0,2 мл стерильного 0,66 М раствора карбоната натрия;
   • 0,2 мл стерильного 0,32 % раствора хлорида кобальта.
6. Непосредственно перед использованием прогреть среду на пару в течение 10 минут.
7. После охлаждения добавить в каждую пробирку 0,2 мл свежеприготовленного стерилизованного через фильтр 1,5 % раствора аскорбата натрия.

Процедура анализа и интерпретация

1. Инокулировать около 2 г образца в бульон с измельчённой печенью (Chopped Liver Broth, M606).
2. Инкубировать при 35–37 °C в течение 20–24 часов. Пробирки с помутнением инокулировать на агар для перфрингенса (Perfringens Agar Base, M837).
3. Подтвердить наличие C. perfringens с помощью биохимических тестов.
4. Пересеять изоляты в среду с варёным мясом (Cooked Meat Medium, M149) и инкубировать при 35–37 °C в течение 24–48 часов.
5. Перенести 2–3 капли культуры в жидкую тиогликолевую среду (Fluid Thioglycollate Medium, M009) и инкубировать при 35–37 °C в течение 18–24 часов.
6. Повторно инокулировать свежую среду M009 этой 24-часовой культурой и инкубировать при 35–37 °C в течение 4 часов.
7. Использовать полученную 4-часовую культуру для инокуляции 15 мл модифицированной среды AEA (M1236).
8. Инкубировать при 35–37 °C в течение 18–24 часов.
9. Проверить образование спор путём микроскопии окрашенных мазков.

Для проверки продукции на образование кислоты перенести 1 мл культуры в пробирку или на планшет и добавить 2 капли 0,04 % раствора бромтимолового синего. Появление жёлтого цвета указывает на продукцию кислоты.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Физико-химические показатели

• Значение pH (при 25 °C): 7,8 $\pm$ 0,2
• Диапазон pH: 7,60–8,00
• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до жёлтого цвета
• Цвет и прозрачность готовой среды: жёлтый прозрачный или слегка опалесцирующий раствор

Дополнительные параметры

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 48–72 часов с добавлением стерильных растворов 10 % раффинозы, карбоната натрия, хлорида кобальта и аскорбата натрия.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре ниже 30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.