Основа модифицированной среды АЕА для стимуляции спорообразования HiMedia M1236-500G (уп/500 гр)

Основа модифицированной среды АЕА для стимуляции спорообразования HiMedia M1236-500G (уп/500 гр) — порошкообразная основа питательной среды для раннего спорообразования Clostridium perfringens. Применяется для анализа пищевых продуктов и подтверждения способности C. perfringens к спорообразованию после приготовления среды с добавлением рафинозы, карбоната натрия, хлорида кобальта и аскорбата натрия.

Назначение

Modified AEA Sporulation Medium используется для раннего индуцирования спорообразования Clostridium perfringens в образцах пищевых продуктов. Среда предназначена для подготовки культуры к последующему исследованию энтеротоксигенности и проверки образования спор по окрашенным мазкам.

Состав

Формула рассчитана на приготовление 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия рабочим параметрам.

Принцип и интерпретация

Clostridium perfringens вызывает пищевые отравления у человека. Загрязнение пищевых продуктов C. perfringens может происходить на бойне, при транспортировке в магазины и на рынки. В пищевых продуктах микроорганизм присутствует в виде вегетативных клеток.

Основные симптомы диареи при отравлении C. perfringens вызывает термолабильный энтеротоксин, который продуцируется только спорулирующими клетками. Энтеротоксин не образуется заранее в пищевом продукте, однако продукты, в которых созданы благоприятные условия для спорообразования, могут содержать токсин. Для определения энтеротоксигенности C. perfringens, выделенных из пищевых продуктов или фекалий, необходимо индуцировать спорообразование.

Модифицированная среда АЕА для спорообразования рекомендована APHA и представляет собой модификацию исходной среды Taniguti; среда предназначена для раннего спорообразования C. perfringens из пищевых продуктов.

Функции компонентов среды:

• Биопептон и дрожжевой экстракт: источники питательных веществ, необходимых для бактериального метаболизма.
• Динатрийфосфат: буферный компонент среды.
• Ацетат аммония, хлорид кобальта, карбонат натрия и сульфат магния: источники ионов, необходимых для спорообразования.
• Рафиноза: ферментируемый углевод.
• C. perfringens ферментирует рафинозу с образованием кислоты.

Для проверки образования кислоты перенесите 1 мл культуры в пробирку или на планшет для капельных реакций и добавьте 2 капли 0,04%-ного бромтимолового синего. Жёлтая окраска указывает на образование кислоты.

Методика проведения анализа

Приготовление среды

1. Суспендируйте 26,31 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию для полного растворения среды.
3. Разлейте среду порциями по 15 мл в пробирки с завинчивающимися крышками.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите среду до 45–50 °C.
6. В каждую пробирку с 15 мл основной среды постепенно добавьте:
   • 0,6 мл профильтрованного стерильного 10%-ного раствора рафинозы;
   • 0,2 мл стерильного 0,66 М раствора карбоната натрия;
   • 0,2 мл стерильного 0,32%-ного раствора хлорида кобальта.
7. Непосредственно перед использованием обработайте среду паром в течение 10 мин.
8. После охлаждения добавьте в каждую пробирку со средой 0,2 мл профильтрованного стерильного свежеприготовленного 1,5%-ного раствора аскорбата натрия.

Выделение и подготовка культуры

1. Внесите около 2 г образца в бульон с измельчённой печенью Chopped Liver Broth (M606).
2. Пробирки, в которых после инкубации при 35–37 °C в течение 20–24 ч наблюдается помутнение, инокулируйте на основу агара для C. perfringens Perfringens Agar Base (M837).
3. Предположительные изоляты C. perfringens дополнительно подтвердите биохимическими тестами.
4. Изоляты, предназначенные для исследования энтеротоксина, пересевайте в среду с варёным мясом Cooked Meat Medium (M149) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 24–48 ч.
5. После инкубации перенесите 2–3 капли культуры в жидкую тиогликолевую среду Fluid Thioglycollate Medium (M009) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 18–24 ч.
6. Засейте свежую жидкую тиогликолевую среду Fluid Thioglycollate Medium (M009) культурой, выдержанной 24 ч.
7. Инкубируйте культуру при 35–37 °C в течение 4 ч.
8. Используйте субкультуру после 4 ч инкубации для инокуляции 15 мл модифицированной среды АЕА для спорообразования Modified AEA Sporulation Medium (M1236).
9. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 18–24 ч.
10. Проверьте образование спор исследованием окрашенных мазков.

Технические характеристики

• Наименование: Modified AEA Sporulation Medium Base.
• Модель / артикул: M1236-500G.
• Назначение изделия: основа питательной среды.
• Физическая форма: порошок.
• Происхождение: животное.
• Тип продукта: стандартный.
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE).
• Масса упаковки: 500 г.
• Сертификат: ФСЗ 2009/03706.
• Конечный диапазон pH при 25 °C: 7,60–8,00.
• Реакция: 2,63%-ный водный раствор при 25 °C.
• Значение pH: 7,8 ± 0,2.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Прозрачный или слегка опалесцирующий раствор жёлтого цвета.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 48–72 ч с добавлением стерильных растворов 10%-ной рафинозы, карбоната натрия, хлорида кобальта и аскорбата натрия.

Условия хранения и срок годности

• Условия хранения порошка: при температуре ниже 30 °C в плотно закрытой ёмкости.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Техническое отличие методики

В отличие от обычных питательных сред для культивирования, Modified AEA Sporulation Medium применяется после предварительного обогащения и последовательного пересева культуры через Chopped Liver Broth (M606), Perfringens Agar Base (M837), Cooked Meat Medium (M149) и Fluid Thioglycollate Medium (M009), с последующей оценкой спорообразования по окрашенным мазкам.