HiMedia M1214F-500G Модифицированный агар с триптоном, соей и дрожжевым экстрактом

Питательная среда HiMedia M1214F-500G Модифицированный агар с триптоном, соей и дрожжевым экстрактом производства HiMedia для подтверждения наличия Listeria и Yersinia. Агар применяют для выделения, культивирования и последующего подтверждения микроорганизмов в пищевых образцах; хранение среды осуществляется при температуре ниже 30 °C, приготовленной среды — при 2–8 °C.

Назначение

Модифицированный триптон-соево-дрожжевой агар предназначен для подтверждения Listeria и Yersinia в соответствии с руководством FDA BAM, 1998.

Среду используют для выделения и культивирования L. monocytogenes и Yersinia из пищевых продуктов. Очистка изолированных колоний на этой среде является обязательным этапом традиционного анализа, поскольку колонии, выделенные на селективных агаризованных средах, могут сохранять контакт с невидимым слабым фоном частично подавленных конкурирующих микроорганизмов. Международная организация по стандартизации также рекомендовала среду для подтверждения видов Listeria.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров эффективности.

Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация результатов

Питательная основа среды содержит ферментативный гидролизат казеина и папаиновый гидролизат соевой муки, поставляющие аминокислоты и другие сложные азотистые вещества. Дрожжевой экстракт является источником витаминов группы B. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс клеток. Агар выполняет функцию отвердителя.

Для предполагаемого загрязнения пищевых образцов листериями или иерсиниями сначала выполняют выделение бактерий с использованием соответствующих селективных агаров. Предположительные колонии Listeria на средах, содержащих эскулин, образуют чёрный ореол.

Колонии исследуют с помощью оптической системы Генри, использующей косо направленный пучок проходящего белого света, достаточно мощный для освещения чашки под углом 45°. Колонии имеют окраску от сине-серой до синей. Наблюдение возможно невооружённым глазом, однако предпочтительно использовать микроскоп с малым увеличением или препаровальный микроскоп. Другие колонии обычно имеют желтоватую или оранжевую окраску.

Методика выделения и подтверждения Listeria monocytogenes

Согласно процедуре обогащения FDA для выделения L. monocytogenes из молочных продуктов:

1. Внесите исследуемый образец в бульон для обогащения и инкубируйте при 30 °C в течение 24–48 ч.
2. Выполните штриховой посев полученной культуры на селективный агар, содержащий эскулин и цитрат железа, например на литий-фенилэтанол-моксалактамовый агар (LPM, M1228), агар для Listeria по Оксфорду (M1145F/M1145) или агар PALCAM (M1064).
3. Инкубируйте посевы при 35 °C в течение 48 ч.
4. Перенесите 5 или более типичных колоний на модифицированный триптон-соево-дрожжевой агар M1214F, выполняя штриховой посев для получения чистой культуры и типичных изолированных колоний.
5. Инкубируйте при 30 °C в течение 24–48 ч.
6. Если колонии не будут использоваться для исследований подвижности методом раздавленной капли, чашки можно инкубировать при 35 °C.

Методика подтверждения Yersinia

Для биохимической характеристики Yersinia:

1. Выполните штриховой посев культуры, выращенной на скошенной поверхности лизин-аргинин-железного агара M1230, на одну чашку с модифицированным триптон-соево-дрожжевым агаром M1214F.
2. Инкубируйте при комнатной температуре в течение 24–48 ч.
3. Используйте полученную культуру для подтверждения биохимическими тестами.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию из 46 г сухой среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
4. Тщательно перемешайте приготовленную среду.
5. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Гелеобразование: плотный гель, сопоставимый с 1,5 % агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется жёлтый прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 4,6 % масс./об. при 25 °C.
• pH: 7,10–7,50.
• Реакция среды при 25 °C: pH 7,3 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 30 °C в течение 24–48 ч.

Технические характеристики

• Тип продукции: стандартный.
• Назначение изделия: агар.
• Физическая форма: порошок.
• Происхождение: животное.
• Упаковка: ПЭВП (полиэтилен высокой плотности).
• Масса: 500 г.
• Температура: 10–30 °C.
• Конечный pH при 25 °C: 7,3 ± 0,2.
• Диапазон pH: 7,10–7,50.

Условия хранения и срок годности

• Сухую среду хранить в плотно закрытой ёмкости при температуре ниже 30 °C.
• Приготовленную среду хранить при 2–8 °C.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.